Summary

Kombinerad Shuttle-Box Träning med Elektro Cortex inspelning och stimulering som ett verktyg för att studera Perception och lärande

Published: October 22, 2015
doi:

Summary

Shuttle-box undvikande lärande är väl etablerat i Behavioral Neuroscience. Detta protokoll beskriver hur shuttle-box lärande hos gnagare kan kombineras med platsspecifika elektriska intrakortikal microstimulation (ICMS) och samtidig kronisk in vivo-inspelningar som ett verktyg för att studera flera aspekter av lärande och perception.

Abstract

Shuttle-box undvikande lärande är en väletablerad metod Behavioral Neuroscience och experimentella inställningar var traditionellt skräddarsydda; nödvändig utrustning finns nu flera kommersiella företag. Detta protokoll ger en detaljerad beskrivning av en tvåvägs shuttle-box undvikande lärande paradigm hos gnagare (här mongoliska ökenråttor, Meriones unguiculatus) i kombination med platsspecifika elektriska intrakortikal microstimulation (ICMS) och samtidiga kroniska elektrofysiologiska in vivo inspelningar. Den detaljerade protokollet är tillämplig att studera flera aspekter av lärande beteende och uppfattning i olika arter av gnagare.

Platsspecifika ICMS av hörsel kortikala kretsar som rade stimuli här används som ett verktyg för att testa perceptuella relevansen av specifika afferenta, efferent och intrakortikal anslutningar. Distinkta aktiveringsmönster kan framkallas genom att använda olika stimuleringselektrod arrays för lokala, skiktberoende ICMS eller avlägsna ICMS webbplatser. Med hjälp av beteendesignaldetektering analys kan fastställas vilken stimulering strategi är mest effektiva för att framkalla en beteende detekterbar och framträdande signal. Vidare, parallella flerkanals-inspelningar med olika elektrod mönster (ytelektroder, djupelektroder, etc.) medger att undersöka neuronala observables under tidsförloppet av sådana inlärningsprocesser. Det kommer att diskuteras hur förändringar av beteende design kan öka den kognitiva komplexitet (t.ex. upptäckt, diskriminering, återföring lärande).

Introduction

En grundläggande syftet med beteende neurovetenskap är att fastställa särskilda förbindelser mellan neuronala strukturella och funktionella egenskaper, lärande och perception. Neural aktivitet i samband med perception och lärande kan studeras genom elektrofysiologiska inspelning av aktionspotentialer och lokala fältet potential i olika hjärnstrukturer på flera webbplatser. Medan elektrofysiologiska inspelningar ger korrelativa samband mellan neural aktivitet och beteende, har direkt elektrisk intrakortikal microstimulation (ICMS) i över ett sekel varit den mest direkta metoden för att testa orsakssamband av glada populationer av nervceller och deras beteendemässiga och perceptuella effekter 1 – 3. Många studier har visat att djur kan utnyttja olika rumsliga och tidsmässiga egenskaper av elektriska stimuli i perceptuella uppgifter beroende på stimulans plats inom exempelvis retinotopic 4, tonotopic 5 eller somatotopic 6 regioner i hjärnbarken. Förökning av elektriskt framkallad aktivitet i cortex bestäms huvudsakligen av utformningen av axonal fibrer och deras distribuerade synaptiska anslutningsmöjligheter 2 som i cortex är klart skikt beroende 7. Den resulterande polysynaptisk aktivering framkallad av ICMS är hädanefter mycket mer utbredd än direkta effekter av det elektriska fältet 2,8,9. Detta förklarar varför trösklar för perceptuella effekter som framkallas av intrakortikal microstimulation kan vara starkt skikt beroende 8,10,11 och platsberoende 9. En nyligen genomförd studie visade i detalj att stimulering av övre skikten gav mer utbredda aktivering av corticocortical kretsar i huvudsak supragranular skikt, medan stimulering av djupare skikt av cortex resulterar i en central, återkommande corticoefferent intracolumnar aktivering. Parallella beteende experiment visade att den senare har mycket lägre perceptuell upptäckt thresholds 8. Därför var fördelen med platsspecifika ICMS som konditionerat stimuli utnyttjas i kombination med elektrofysiologiska inspelningar kausalt relatera specifika kortikala kretsaktive 8 till beteende åtgärder för inlärning och uppfattning i skytteln-box.

De två transfer-box paradigm är en väletablerad laboratorieutrustning för att studera undvikande lärande 12. En shuttle-box består av 2 fack åtskilda av ett hinder eller en port. En betingad stimulus (CS) som representeras av en lämplig signal som en ljus eller ljud, är contingently följt av en aversiv obetingat stimulus (US), exempelvis en fotchock över ett metallgallergolv. Ämnen kan lära sig att undvika USA genom shuttling från en buss till-box avdelningen till den andra såsom gensvar på CS. Shuttle-box lärande innebär en sekvens av urskiljbara inlärningsfaser 13,14: För det första,ämnen lära sig att förutsäga USA från CS genom klassisk betingning och att fly från USA av instrumentbräda, som USA avslutas på skytteltrafik. I nästa fas, ämnen lära sig att undvika USA helt och hållet genom shuttling som svar på CS innan amerikanska debut (undvikande reaktion). Generellt innebär shuttle-box lärande klassisk betingning, instrumental conditioning, samt målinriktat beteende beroende på inlärningsfas 14.

Buss-box förfarande kan sättas upp enkelt och generellt ger robust beteende efter några dagliga träningspass 15 – 17. Förutom enkel undvikande konditione (detektion), kan skytteln-box användas vidare för att studera stimulans diskriminering genom att använda go / Nogo paradigm. Här djuren utbildas för att undvika USA med en betingad respons (CR) (gå beteende, shuttle till motsatt fack) som svar på en <strong> go-stimulus (CS +) och Nogo beteende (stanna i nuvarande facket, ingen CR) som svar på en Nogo-stimulus (CS) Parallell microstimulation och registrering av nervcellsaktivitet med hög densitet multielektrodtyp arrayer möjligt att studera. de fysiologiska mekanismer som ligger bakom framgångsrik inlärning. Flera tekniska detaljer som är grundläggande för lyckade kombinationer av shuttle-box utbildning, ICMS och parallellt elektrofysiologi, kommer att diskuteras.

Protocol

Alla experiment som presenteras i detta arbete genomfördes i samförstånd med de etiska normer som fastställts av den tyska lagen om skydd av försöksdjur. Experiment har godkänts av den etiska kommittén i delstaten Sachsen-Anhalt. 1. Skräddarsydda Multichannel Elektrod matriser för Microstimulation och inspelning Skräddarsydda microstimulation array För att leverera ICMS, förbereda stimuleringselektroderna i önskad rumslig gestaltning (här i sidled uppsättn…

Representative Results

Det här avsnittet visar ett representativt exempel på shuttle-box lärande i en mongolisk gerbil. Ämnet var tränad att diskriminera ICMS stället mellan två stimuleringselektroder implanterades 700 | im från varandra i hörselbarken (figurerna 1 och 2). Stimulering arrayer kan anpassas i olika rumsliga konstruktioner (Figur 1). Här var diskriminering av de två ICMS platserna lärt inom 3 träningspass med presentation av 30 CS + och CS- vardera (Figur 3A…

Discussion

Detta protokoll beskriver en metod samtidiga platsspecifika ICMS och flerkanaliga elektrofysiologiska inspelningar i en lärande djur med hjälp av en tvåvägs aversive fot-chock kontrollerad shuttle-box-systemet. Protokollet betonar tekniska nyckelbegrepp för en sådan kombination och påpekar vikten av att jorda djuret endast via sin gemensamma jordelektrod, lämnar gridfloor på en flytande spänning. Här var hörsel shuttle-box lärande tillämpas på mongoliska gerbiler som inlärningsrelaterade plast omorganisa…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Arbetet har finansierats med bidrag från Deustche Forschungsgemeinschaft DFG och Leibniz-Institut för neurobiologi. Vi tackar Maria-Marina Zempeltzi och Kathrin Ohl för tekniskt stöd.

Materials

Teflon-insulated stainless steel wire California Fine Wire diam. 50µm w/ isolation
Pin connector system  Molex Holding GmbH 510470200 1.25 mm pitch PicoBlade
TEM grid Quantifoil Science Services EQ225-N27
Dental acrylic Paladur Heraeus Kulzer 64707938
Hand-held drill OmniDrill35 WPI  503599
Ketamine 500mg/10ml Ratiopharm GmbH 7538837
Rompun 2%, 25ml Bayer Vital GmbH 5066.0
Sodium-Chloride 0.9%, 10ml B.Braun AG  PRID00000772
Lubricant KY-Jelly Johnson & Johnson
Shuttle-box E10-E15 Coulbourn Instruments H10-11M-SC
Stimulus generator MCS STG 2000 Multichannel Systems
Plexon Headstage cable 32V-G20 Plexon Inc. HSC/32v-G20
Plexon Headstage  32V-G20 Plexon Inc. HST/32v-G20
PBX preamplifier 32 channels Plexon Inc. 32PBX box
Multichannel Acquisition System Plexon Inc. MAP 32/HLK2
Cryostate CM3050 S Leica Microsystems GmbH
Signal processing Card Ni-Daq National Instruments
Lab StandardTM Stereotaxic Instruments Stoelting Co. 
Audio attenator g.pah g.pah Guger technologies
Cresyl violet acetate Roth GmbH 7651.2
Roticlear  Roth GmbH A538.1
Sodium acetate trihydrate Roth GmbH 6779.1
Potassium hexacyanoferrat(II) trihydrate Roth GmbH 7974.2
Di-sodium hydrogen phospahte dihydrate Merck 1,065,801,000
ICM Impedance Conditioning Module FHC 55-70-0
Animal Temperarture Controler World Precision Instruments ATC2000

References

  1. Cohen, M. R., Newsome, W. T. What electrical microstimulation has revealed about the neural basis of cognition. Current Opinion in Neurobiology. 14 (2), 169-177 (2004).
  2. Histed, M. H., Bonin, V., Reid, R. C. Direct activation of sparse, distributed populations of cortical neurons by electrical microstimulation. Neuron. 63 (4), 508-522 (2009).
  3. Histed, M. H., Ni, A. M., Maunsell, J. H. R. Insights into cortical mechanisms of behavior from microstimulation experiments. Progress in Neurobiology. 103, 115-130 (2013).
  4. Bradley, D. C., et al. Visuotopic mapping through a multichannel stimulating implant in primate V1. Journal of Neurophysiology. 93, 1659-1670 (2005).
  5. Scheich, H., Breindl, A. An Animal Model of Auditory Cortex Prostheses. Audiology and Neurootology. 7 (3), 191-194 (2002).
  6. Romo, R., Hernández, A., Zainos, A., Salinas, E. Somatosensory discrimination based on cortical microstimulation. Nature. 392, 387-390 (1998).
  7. Douglas, R. J., Martin, K. A. C. Recurrent neuronal circuits in the neocortex. Current Biology. 17 (13), 496-500 (2004).
  8. Happel, M. F. K., Deliano, M., Handschuh, J., Ohl, F. W. Dopamine-modulated recurrent corticoefferent feedback in primary sensory cortex promotes detection of behaviorally relevant stimuli. The Journal of Neuroscience. 34 (4), 1234-1247 (2014).
  9. Deliano, M., Scheich, H., Ohl, F. W. Auditory cortical activity after intracortical microstimulation and its role for sensory processing and learning. The Journal of Neuroscience. 29 (50), 15898-15909 (2009).
  10. DeYoe, E. A., Lewine, J. D., Doty, R. W. Laminar variation in threshold for detection of electrical excitation of striate cortex by macaques. Journal of Neurophysiology. 94 (5), 3443-3450 (2005).
  11. Tehovnik, E. J., Slocum, W. M., Schiller, P. H. Delaying visually guided saccades by microstimulation of macaque V1: spatial properties of delay fields. The European Journal of Neuroscience. 22 (10), 2635-2643 (2005).
  12. Wetzel, W., Wagner, T., Ohl, F. W., Scheich, H. Categorical discrimination of direction in frequency-modulated tones by Mongolian gerbils. Behavioural Brain Research. 91, 29-39 (1998).
  13. Cain, C. K., LeDoux, J. E. Escape from fear: a detailed behavioral analysis of two atypical responses reinforced by CS termination. Journal of Experimental Psychology. Animal behavior processes. 33, 451-463 (2007).
  14. Stark, H., Rothe, T., Deliano, M., Scheich, H. Dynamics of cortical theta activity correlates with stages of auditory avoidance strategy formation in a shuttle-box. 神经科学. 151, 467-475 (2008).
  15. Ohl, F. W., Wetzel, W., Wagner, T., Rech, A., Scheich, H. Bilateral ablation of auditory cortex in Mongolian gerbil affects discrimination of frequency modulated tones but not of pure tones. Learning & Memory. 6 (4), 347-362 (1999).
  16. Kurt, S., Ehret, G. Auditory discrimination learning and knowledge transfer in mice depends on task difficulty. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107 (18), 8481-8485 (2010).
  17. Happel, M. F. K., et al. Enhanced cognitive flexibility in reversal learning induced by removal of the extracellular matrix in auditory cortex. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 111 (7), 2800-2805 (2014).
  18. Thomas, H., Tillein, J., Heil, P., Scheich, H. Functional organization of auditory cortex in the mongolian gerbil (Meriones unguiculatus). I. Electrophysiological mapping of frequency representation and distinction of fields. The European journal of neuroscience. 5, 882-897 (1993).
  19. Budinger, E., Heil, P., Scheich, H. Functional organization of auditory cortex in the Mongolian gerbil (Meriones unguiculatus). III. Anatomical subdivisions and corticocortical connections. European Journal of Neuroscience. 12, 2425-2451 (2000).
  20. Langford, D. J., et al. Coding of facial expressions of pain in the laboratory mouse. Nature Methods. 7 (6), 447-449 (2010).
  21. Ohl, F. W., Scheich, H., Freeman, W. J. Change in pattern of ongoing cortical activity with auditory category learning. Nature. 412 (6848), 733-736 (2001).
  22. Scheich, H., et al. Behavioral semantics of learning and crossmodal processing in auditory cortex: the semantic processor concept. Hearing Research. 271 (1-2), 3-15 (2011).
  23. Happel, M. F. K., Jeschke, M., Ohl, F. W. Spectral integration in primary auditory cortex attributable to temporally precise convergence of thalamocortical and intracortical input. The Journal of Neuroscience. 30 (33), 11114-11127 (2010).
  24. Ranck, J. B. Which elements are excited in electrical stimulation of mammalian central nervous system: a review. Brain Research. 98, 417-440 (1975).
  25. Clark, K. L., Armstrong, K. M., Moore, T. Probing neural circuitry and function with electrical microstimulation. Proceedings. Biological sciences / The Royal Society. 278 (1709), 1121-1130 (2011).
  26. Ilango, A., Shumake, J., Wetzel, W., Scheich, H., Ohl, F. W. Electrical stimulation of lateral habenula during learning: frequency-dependent effects on acquisition but not retrieval of a two-way active avoidance response. PloS one. 8 (6), e65684 (2013).
  27. Weible, A. P., McEchron, M. D., Disterhoft, J. F. Cortical involvement in acquisition and extinction of trace eyeblink conditioning. Behavioral Neuroscience. 114, 1058-1067 (2000).
  28. Rothe, T., Deliano, M., Scheich, H., Stark, H. Segregation of task-relevant conditioned stimuli from background stimuli by associative learning. Brain Research. 1297, 143-159 (2009).

Play Video

Cite This Article
Happel, M. F., Deliano, M., Ohl, F. W. Combined Shuttle-Box Training with Electrophysiological Cortex Recording and Stimulation as a Tool to Study Perception and Learning. J. Vis. Exp. (104), e53002, doi:10.3791/53002 (2015).

View Video