Shuttle-box vermijdingsleren is goed opgericht in behavioral neurowetenschappen. Dit protocol beschrijft hoe shuttle-learning in knaagdieren kan worden gecombineerd met locatie-specifieke elektrische intracorticale microstimulatie (ICMS) en gelijktijdige chronische in vivo opnames als een instrument om meerdere aspecten van leren en perceptie bestuderen.
Shuttle-box vermijden leren is een gevestigde methode in gedrags-neurowetenschappen en experimentele opstellingen waren van oudsher op maat; de nodige apparatuur is nu beschikbaar door diverse commerciële bedrijven. Dit protocol geeft een gedetailleerde beschrijving van een twee-weg shuttle-box vermijden leren in knaagdieren (hier Mongoolse gerbils; Meriones unguiculatus) in combinatie met locatie-specifieke elektrische intracorticale microstimulatie (ICMS) en gelijktijdig chronisch elektrofysiologische in vivo opnames. De gedetailleerde protocol is van toepassing op verschillende aspecten van het leergedrag en perceptie in verschillende soorten knaagdieren bestuderen.
Plaatsspecifieke ICMS auditieve corticale circuits geconditioneerde stimuli hier wordt gebruikt als een instrument om het perceptuele belang van specifieke afferente, efferente en intracorticale verbindingen te testen. Distinct activeringspatronen kan worden opgewekt door verschillende stimulatie-elektrode arrays voor lokale, laag-afhankelijke ICMS of verre ICMS sites. Gebruik makend behavioral signaaldetectie analyse kan worden bepaald welke stimulatiestrategie het meest effectief voor het opwekken van een gedragsmatig detecteerbaar en opvallende signaal. Verder parallel multichannel-opnamen met verschillende elektrode-ontwerpen (oppervlakte-elektroden, diepte-elektroden, enz.) Zorgen voor het onderzoeken van neuronale van de zichtbaarheid in het tijdsverloop van dergelijke leerprocessen. Het zal worden besproken hoe veranderingen van het ontwerp van de cognitieve gedragstherapie complexiteit kunnen verhogen (bv detectie, discriminatie, reversal learning).
Een fundamentele doelstelling van behavioral neurowetenschappen is om specifieke verbindingen tussen neuronale structurele en functionele eigenschappen, leren en waarneming vast te stellen. Neurale activiteit in verband met de perceptie en leren kan worden bestudeerd door elektrofysiologische opname van actiepotentialen en lokale veld potentieel in verschillende hersenstructuren op meerdere plaatsen. 3 – terwijl elektrofysiologische opnames bieden correlatieve associaties tussen neurale activiteit en gedrag, heeft directe elektrische intracorticale microstimulatie (ICMS) voor meer dan een eeuw de meest directe methode voor het testen van causale relaties van opgewonden populaties van neuronen en hun gedrag en perceptuele effecten 1 geweest. Vele studies hebben aangetoond dat dieren kunnen maken van verschillende ruimtelijke en temporele eigenschappen van elektrische stimuli perceptuele taken naargelang de stimulatie plaats binnen bijvoorbeeld retinotopische 4, vooreerstonotopic 5 of somatotopic 6 regio's in de cortex. Voortplanting van elektrisch opgewekte activiteit in de cortex wordt voornamelijk bepaald door de indeling van axonale vezels en hun gedistribueerd synaptische connectiviteit 2 dat in cortex, duidelijk layer-afhankelijke 7. De resulterende polysynaptic activering opgeroepen door ICMS is voortaan veel meer wijdverspreid dan de directe effecten van het elektrisch veld 2,8,9. Dit verklaart waarom de drempels van perceptuele effecten opgewekt door intracorticale microstimulatie sterk layer-afhankelijke 8,10,11 en locatie-afhankelijke 9 kan zijn. Een recente studie toonde in detail dat de stimulatie van de bovenste lagen leverde meer wijdverbreide activering van corticocortical circuits in voornamelijk supragranular lagen, terwijl het stimuleren van de diepere lagen van de cortex resulteren in een brandpunt, terugkerende corticoefferent intracolumnar activering. Parallelle gedragsexperimenten bleek dat de laatste heeft veel lagere perceptuele detectie THResholds 8. Daarom is het gebruik van plaatsspecifieke ICMS als geconditioneerde stimuli werd in combinatie met elektrofysiologische opnames benut causaal verband specifieke corticale circuit activeringen 8 tot gedragsmaten leren en waarneming in de shuttle-box.
De twee-weg shuttle-box paradigma is een gevestigde laboratoriumapparatuur te vermijden leren 12 te bestuderen. Een shuttle-box bestaat uit 2 compartimenten gescheiden door een hindernis of deuropening. Een geconditioneerde stimulus (CS), die wordt vertegenwoordigd door een geschikte signaal als een licht of geluid, is voorwaardelijk gevolgd door een aversieve ongeconditioneerde stimulus (US), zoals bijvoorbeeld een voet schok over een metalen roostervloer. Onderwerpen kunnen leren de Amerikaanse vermijden door shuttling van een shuttle-box compartiment naar het andere in reactie op het CS. Shuttle-box learning omvat een reeks van onderscheiden leerfasen 13,14: Ten eerste,onderwerpen leren om de VS uit het CS te voorspellen door klassieke conditionering en om te ontsnappen aan de VS door instrumentale conditionering, de VS wordt beëindigd op pendelen. In een volgende fase, onderwerpen leren de Amerikaanse helemaal te vermijden door shuttling reactie op de CS bij Amerikaanse aanzet (vermijding reactie). In het algemeen, shuttle-box leren impliceert klassieke conditionering, instrumentale conditionering, evenals doelgericht gedrag afhankelijk leerfase 14.
De shuttle-box procedure kan worden ingesteld eenvoudig en over het algemeen produceert robuust gedrag na een paar dagelijkse trainingen 15-17. Naast eenvoudige vermijding conditionering (detectie), kan de shuttle-box verder worden gebruikt voor discriminatie stimulus bestuderen door gebruik go / nogo paradigma. Hier worden dieren getraind om de VS door een geconditioneerde respons (CR) (ga gedrag; shuttle in tegenovergestelde compartiment) voorkomen in reactie op een <strong> go-stimulus (CS +) en Nogo gedrag (verblijf in de huidige compartiment, geen CR) in reactie op een Nogo-stimulus (CS) Parallelle microstimulatie en registratie van neurale activiteit high-density Multielectrode laten bestuderen. de fysiologische mechanismen die ten grondslag liggen succesvol leren. Diverse technische details die van fundamenteel belang voor de succesvolle combinaties van shuttle-box training ICMS en parallelle elektrofysiologie zijn, zullen worden besproken.
Dit protocol beschrijft een methode van simultane site-specific ICMS en multi-channel elektrofysiologische opnames in een leren dier met behulp van een twee-weg aversieve voet shock-gecontroleerde shuttle-box systeem. Het protocol legt de nadruk technische kernbegrippen voor deze combinatie en wijst op het belang van de aarding van de dieren alleen via de gemeenschappelijke grond elektrode, het verlaten van de roostervloer op een drijvend spanning. Hier werd auditief shuttle-box leren toegepast op Mongoolse gerbils als-…
The authors have nothing to disclose.
Het werk werd ondersteund door subsidies van de Deustche Forschungsgemeinschaft DFG en het Leibniz-Instituut voor Neurobiologie. Wij danken Maria-Marina Zempeltzi en Kathrin Ohl voor technische ondersteuning.
Teflon-insulated stainless steel wire | California Fine Wire | diam. 50µm w/ isolation | |
Pin connector system | Molex Holding GmbH | 510470200 | 1.25 mm pitch PicoBlade |
TEM grid Quantifoil | Science Services | EQ225-N27 | |
Dental acrylic Paladur | Heraeus Kulzer | 64707938 | |
Hand-held drill OmniDrill35 | WPI | 503599 | |
Ketamine 500mg/10ml | Ratiopharm GmbH | 7538837 | |
Rompun 2%, 25ml | Bayer Vital GmbH | 5066.0 | |
Sodium-Chloride 0.9%, 10ml | B.Braun AG | PRID00000772 | |
Lubricant KY-Jelly | Johnson & Johnson | ||
Shuttle-box E10-E15 | Coulbourn Instruments | H10-11M-SC | |
Stimulus generator MCS STG 2000 | Multichannel Systems | ||
Plexon Headstage cable 32V-G20 | Plexon Inc. | HSC/32v-G20 | |
Plexon Headstage 32V-G20 | Plexon Inc. | HST/32v-G20 | |
PBX preamplifier 32 channels | Plexon Inc. | 32PBX box | |
Multichannel Acquisition System | Plexon Inc. | MAP 32/HLK2 | |
Cryostate CM3050 S | Leica Microsystems GmbH | ||
Signal processing Card Ni-Daq | National Instruments | ||
Lab StandardTM Stereotaxic Instruments | Stoelting Co. | ||
Audio attenator g.pah | g.pah Guger technologies | ||
Cresyl violet acetate | Roth GmbH | 7651.2 | |
Roticlear | Roth GmbH | A538.1 | |
Sodium acetate trihydrate | Roth GmbH | 6779.1 | |
Potassium hexacyanoferrat(II) trihydrate | Roth GmbH | 7974.2 | |
Di-sodium hydrogen phospahte dihydrate | Merck | 1,065,801,000 | |
ICM Impedance Conditioning Module | FHC | 55-70-0 | |
Animal Temperarture Controler | World Precision Instruments | ATC2000 |