功能人类肝脏保存和恢复由Subnormothermic机灌注手段

使用人体组织，必须由机构审查委员会（IRB）或同等学历进行审查。这里所描述的工作被批准，并宣布免除由马萨诸塞州总医院的机构审查委员会（第2011P001496）。 1.溶液制备无菌添加补充苯酚如表1所列红的威廉姆斯E培养基。该解决方案应该准备使用前新鲜。胰岛素应在使用前加入。 肝脏2.返回表准备将冰填充的器官碗消毒，披面。从包装盒中取出肝脏，把它留在冷保存液囊中。保持大都淹没肝脏。 确定肝动脉（HA），其将位于远端的主动脉补丁。解剖免费动脉揭示各种切枝沿梅岑鲍姆用剪刀长度。仔细狄氏克拉动脉的整个长度，以防止切割供给肝脏的容器中。不要削减或领带没有一个明显的结束分支机构。 打结所有动脉分支不供给用丝线缝合范围从大小为0〜4-0，这取决于容器的大小肝脏。关闭分支太短配合或与7-0普理灵一针动脉孔。领带和削减接近其原产地在腹腔干的脾和胃左动脉。 通过补丁直接下切腹腔干取出主动脉补丁。导管插入使用主动脉插管腹腔干。 识别门静脉（PV）和直截了当地剖析它自由。配合关闭所有分支机构和导管插入PV与大小24管的准备环节。 从肝上腔静脉中取出膜片的部分中，不切断静脉本身。流出腔静脉排水沟直接进入器官腔。 削减2全圆周TIssue样品（2-3毫米长）从胆总管的结束;卡扣冻结1在液氮中（储存在-80℃）和其他储存在10％缓冲的福尔马林，用于组织和组织学分析，分别。导管插入胆总管与容器插管和一个排放管制成膜式氧合油管。 识别并结扎胆囊管与一个0真丝领带。胆囊管的胆总管和胆囊的发现。 连接冲洗管设置为冰冷的袋乳酸林格（LR）的解决方案和优质的管材，删除所有的空气。 设置冲洗管道的流量调节到一个缓慢滴入。在此之前的冲洗管道连接到门静脉插管，阻塞门静脉用手指在肺门和填充套管和静脉冲洗以从门静脉取出空气。不要提升袋20多厘米了肝脏的高度在寒冷的冲洗，以避免压力过大静脉。 在冲洗简要阻塞光伏在最低点。检查PV是否有泄漏。如上所述血管分支可以被关闭。冲洗经PV肝脏总的2升冰冷的LR。 医管局与1升LR重复步骤2.10，2.11。 3.底漆的SNMP系统素加入2升灌注液（21℃）到器官碗和设备开始灌注管道灌注设备。按照该设备的指令，以用于灌注准备，将温度设定为21℃。首先，3毫米汞柱和30毫米汞柱对PV和HA分别压力。打开燃气罐，并设置为3升/分钟的流量。 取来自所述HA和光伏流入血液气体样品通过绘制从样品端口0.3 ml样品，并根据制造商的说明在血液气体分析机运行它。确认充分氧合（PO 2> 700毫米汞柱）和pH值（7.35-7.45）。 前连接在肝脏取灌洗液的1.0 ml样品截至= 0测量在Eppendorf管中并储存在-80℃。切从使用单刃刀片钢肝脏2±250毫克楔活检;卡扣冻结1在液氮中（储存在-80℃）和其他储存在10％缓冲福尔马林中。灌注前称量肝脏。 4.人类肝脏灌注肝脏传送到设备。光伏流入连接到PV套管，从PV除去空气如在步骤2.10之后。连接HA以类似的方式。设置的PV和HA压力至3和30毫米汞柱。肝脏应该由灌流几乎被淹没。包括任何干燥的表面，包括流入血管，用湿消毒纱布，防止脱水让胆汁管排入收集容器。确保胆汁漏的开口是在肝脏的水平或更低，以允许胆汁运行öUT自如。 目标流量分别为275-325毫升/ min.kg和50-100毫升/ min.kg的PV和HA一旦肝脏已经加热到21°C。因为每个肝反应不同灌注，监控在第一分钟内的流动密切。增加或减少的压力在任一船只如果目标流率没有达到。不超过50毫米汞柱的HA和5毫米汞柱的PV。 样品可以取自肝脏组织，灌注液和胆汁在研究者的偏好。我们灌注期间建议至少以下样本采集方案。 组织切片中，n = 2×250毫克，每隔一小时。储存：扣在液氮和存储冻结1在-80℃的长期的。此外，采取另一种活检前和灌注后和在10％的缓冲福尔马林固定（N = 1） 灌注液样品中，n = 2×1毫升，每次15分钟，在第一个小时，此后每隔30分钟。从PV INF借鉴的样本较低的采样口。储存：-80℃长期。 PV和HA流入，腔静脉流出血气分析。 N = 3×0.3毫升每30分钟。同时从PV和HA样品端口借鉴样本。通过将注射器插入静脉绘制从腔静脉0.3 ml样品和血液气体分析仪直接运行。使用输出，以保证足够的氧和pH值。 胆汁分泌，N = 1×1毫升每一个小时。直观地量化胆汁分泌每隔一小时，并从收集容器的样本。续订取样后的容器。贮存：干冰和-80℃长期。 继续灌注3小时。监测压力，pH和氧和整个采取样品。通过加入碳酸氢钠至灌流调节他的pH值。 在灌注结束走完最后的样本，而肝脏被灌注。断开的肝脏，取出胆管插管。取2后灌注组织样本如前所述储存在-80℃并在10％缓冲的福尔马林胆管。 放弃人类肝脏下面妥善处置生物危害的准则。