말린된 피 명소-준비 및 Immunoassays 및 분자 기술 사용에 대 한 처리

DBS 100 년² 에 대 한 사용 되었습니다 하지만, 놀랍게도, 아직 그들의 준비 및 처리에 대 한 일반적인 합의 없다입니다. 날짜 하려면,이 중요 한 사전 분석 단계의 충분 한 표준화만 달성 하고있다 신생아 검사¹⁴의 분야에서 다양 한 다른 프로토콜 DBS 테스트^{5, 16, 23}의 다른 모든 응용 프로그램에 대 한 존재 하는 반면. 이 놀라운이 극복 하기 위해 immunoassays과 분자 기술로 활용 될 준비 하 고 DBS를 처리에 대 한 포괄적인 단계별로 지침이이 통신에 및 그 효과 관한 평가 HBV, HCV, HIV 감염의 마커를 감지에 대 한 합니다. 다음 논의의 초점은 주로 제안 된 프로토콜의 여러 단계에 배치 됩니다.

많은 다른 지를 테스트 하는 DBS의 역사에서 카드 사용된² 왔지만 오늘만 두 상용 소스 장치로 클래스 II 의료 혈액 컬렉션^{5, 16}에 대 한 FDA에 의해 승인 됩니다. 이러한 필터 카드 시스템 매우 균일 하 고 그들 중에 준비 하는 모 세관 혈액에서 얻은 분석 결과 4%-5²⁸이상으로 차이가 없습니다 있도록 매우 유사한 흡수 특성을가지고. 아니나 다를까, Masciotra와 동료²⁹ 따라서 hiv-1 RNA를 발견 다른 소스에서 혈액 컬렉션 카드에서 차입 후 질적 분석 결과와 동등 하 게 잘. 이러한 데이터를 감안할 때, 그것은 제외할 수 있습니다 거의 테스트 때 관찰 하는 불일치의 HBV, HCV의 표식에 대 한 혈 청/DBS 쌍을 결합 하 고 HIV 감염¹⁷ 혼자 필터 카드의 선택에 의해 발생 했다. 그러나, 정확한 정량화 된 분석의 불가결 이면 소스-소스 변형 더 이상 무시할 수 없습니다 및 더 정교한 기술, 예를 들어, microsampling³⁰ 또는 준비 하기 위한 방법으로 DBS (PDB) 천공 건조 혈 청 관광 명소의 (DSS)³¹ 기존의 DBS¹⁰테스트 대신 적용할 할 수 있습니다.

DBS 테스트에 사용 되는 작은 양의 피 때문 (모 세관 혈액 한 방울 이루어져 약 50 µ l)^{5, 16}, 샘플 볼륨 변화는 중요 한, 그리고 명백 하 게, 적어도 일부의 혈 청 학적인 결과 사이의 불일치 그리고 참가자의 자기 보고 “DRUCK 연구”의 조종 하는 동안 기록 하는 HBV 및 HCV 상태가 변수에 기인. 샘플 볼륨의 “변동”을 최소화 하기 위한 하나의 가장 중요 한 요인은 의심할 여 지 없이 기술 인력²²의 신중 하 고 지속적인 훈련에 의해 달성 될 수 있는 모 세관 혈액 컬렉션의 올바른 기술입니다. 또한, 품질 관리의 수단으로 모든 실험실 작업 DBS는 이미 시작 합니다 식별 하 고 그 후 불만족 또는 유효 하지 않은¹⁶으로 간주 될 수 있는 DBS 표본 제외에 대 한 절차.

주로 HIV³² 의 맥락에서 연구 하 고 신생아 심사³³ 높은 습도, analytes의 저하로 이어질 수 있습니다 하지만 지금까지 아무런 합의 도달 했습니다 얼마나 DBS air-dried 해야한다의 질문에 대 한 . O/N이이 통신에서 HBV와 HCV에 사용할 이후에 모든 관련 간행물^{32, 34} 데이터 DBS의 저장에의 대다수에서 사용 된 조건을 따라서 채택 제안 간격 4 시간 이상 또는 선호 테스트 상반 된다입니다. 1981 년, 빌라와 동료³⁵, 현대 분석 기법을 적용, 보고는 RT에 스토리지 미치지 않았다 HBV 분석의 결과 180 일의 전체 관찰 기간 동안 항 체 titers 라면 > 1/1000, 하지만 그 DBS 15 일 titers 혈 청에만 1/100 후 경계선 긍정 또는 부정적인 되었다. -20 ° C 또는 4 ° C에서 저장 상당한 개선에 발생 하지 않았다. 대조적으로, 30 년 이상³⁶ 테스트 HBV 양성 샘플의 복제를 연구 하 고 저자 발견 그 Anti-hbc 뿐만 아니라 안티-HBs 항 체 했다 최대 183 일 동안에 RT, 안정적인 반면 동일한 조건 하에서 HBsAg 되었다 63 일 후에 이미 false 음수가 DBS 있다에서 HBV DNA 검출, 관련 바이러스 핵 산의 농도 37 ° C³⁷ 에 적어도 7 일 동안 안정 또는 최대 3 주까지 RT에서 저장소에 “저항” 입증³⁸. 117 일 DBS 샘플-20 ° C, 2-8 ° C, 및 20-25 ° C에 각각 저장을 사용 하 여 기간에 대 한 정확한 결과 제공 하는 immunoassays³⁹ 두 상용 제 3 세대를 사용 하 여 안티-HCV 항 체 테스트. 하지만-20 ° C에서 저장, 광학 밀도의 낮은 변화 귀착되는. 적용 하는 4 세대 안티-HCV ELISA, 즉, Monolisa HCV-Ag-Ab-울트라, DBS 테스트, Larrat 그 외 여러분 의 맥락에서 ⁴⁰ 데시벨 표본 실시간에 3 일 이상 저장 후 분석 특이성에 날카로운 감소를 관찰 다른 한편으로, 정확한 테스트 결과 같은 키트 샘플 Brandao 및 동료⁴¹에 의해 다양 한 조건 (-20 ° C, 2-8 ° C, 및 22-26 ° C)에서 60 일 동안 입금을 이용 하 여 얻은 했다. 다양 한 보관 조건에서 DBS에서 HCV RNA 농도의 감소에 대 한 관찰 최대 1 년⁴² RT에서 없음 중요 한 변경에서 온도⁴³4 주 후 10 배로 변경 범위. DBS 표본 사용할 수의 저장소에 대 한 이전 정의 합의를 제안 된 프로토콜에서 철회 합리적인 듯 HBV 및 HCV 항, 핵 산 및 계정에 항 체의 안정성에이 오히려 충돌 데이터를 복용, HIV 검사^{15, 30}: 단기 증 착 (최대 2 주)에 대 한 항 원, 바이러스 성 핵 산 및 항 체 간주 됩니다 RT에서 안정으로 오랜 동안 보관 냉동된 조건에는.

일반적으로 세 개의 매개 변수가 고려 되어야 할 때 차입 프로토콜 설계: (1) 차입 버퍼; (2) 기간 및 차입;의 온도 (3) 차입 볼륨²³. 모든 관련 간행물의 대다수에서 인산 염 버퍼 식 염 수 (PBS) DBS, 방출 사용 되었다 고 대부분 저자 추가 단백질, 예를 들면, 소 혈 청 알 부 민 (BSA) 또는 트윈 20, 계면 활성 제, 안정화 하 여 분석 결과 신호를 개선 단백질, 그들은 솔루션을 동시에 차단 비 특정 바인딩 사이트²³로 서. DBS 테스트의 컨텍스트에서 다른 차입 버퍼, 직접 비교는 단지 몇 가지 보고서를 사용할 수 있습니다. 빌라 외. ³⁶, 예를 들어, 기록 된 모든 버퍼 PBS/BSA 하지만 사용에 대 한 거의 차입 용량 0.5% 비 특정 반응성의 저급에 결과. 매우 비슷한 관찰 Croom 및 동료⁴⁴ 에 의해 만들어진 DBS에서 안티-HCV 항 체의 차입에 대 한 유전학 시스템 rLAV EIA의 표본 희석제를 적용할 때. 관광 명소 주위 온도에 O/N을 품 어 부드러운 끝 이상 혼합 하 여 차입 과정을 지원 하 고 샘플 저하의 위험 DBS (위 참조)의 준비 후 첫 번째 시간에서 매우 낮은 이기 때문에, 결정 되었다. 이 방법은 표본 이전 날 렸을 장점이 하루 옮겨질 수 있다 직접 일상 진단 일찍 다음 아침²³. 차입 버퍼의 희석 비율을 가능한 한 낮게 유지 후속 분석을 위해 사용 하는 분석 실험의 최소한의 각 요구 사항에 적응 한다. 그러나 높은 견본 처리량 “DRUCK 연구”¹⁷동안 비교적 짧은 시간에 보장 해야 하기 때문에, 모든 단일 분석에 대 한 차입 조건의 주의 최적화 이전 평가에서 가능 하지 않았다. 따라서, 오히려 불리 한 볼륨 PBS 기반 버퍼의 1000 µ l의 두 가지 별도 작업의 모든 매개 변수에 대 한 전체 차입 과정을 완료 하기 위해 사용 되었다.

하나이 이렇게 한 손으로 “완전히 낮은 항 체 농도; 인해 HIV에 감염 하는 그 개인에 대 한 안티-HBc/안티-HBs 시스템에서 실패 …, 그것은 분자 생물학 절차 HBV DNA에 관해서는 최적의 분석 감도 및 필요 HCV RNA 검사. ” ¹⁷ 다른 한편으로, 높은 차입 볼륨 어떠한 방식으로 HBsAg, 안티-HCV, 및 평가에서 사용 되는 키트에 의해 반대로 HIV에 대 한 불리 한 것으로 판명. “전체 혈액 있다에서 긍정적인 재료 100 µ l, 250 µ l, 또는 600 µ l, 500 µ l의 훨씬 작은 차입 볼륨 사용 부분에서 이전 연구에서 유사 하 게 높은 정도로 98.6%의 감도와 성공 HBsAg의 검출”^{17 36, 45, 46}. 안티-HCV 항 체는 이미 존재의 결과에 대응에 대 한 179 혈 청/DBS 쌍의 조사에서 결정 하는 97.8%의 민감도 보고서^{24, 44, 47, 48, 49}, 5 ~ 10 배 낮은 차입 볼륨 근무 했다. “또한, 안티-HCV 검출에 대 한 프로토콜 했다 적절 하 게 최적화 되었습니다… 자신의 잘라 포인트를 규정 하 여”^{17, 24, 48, 49} “또는 20 µ l에서 100 µ l의 샘플 볼륨을 증가.” ^{17, 49} 마지막으로, 분석 특이성 및 감도 (100%) 반대로 HIV 탐지에 대 한 설립 했다 같거나 다른 immunoassays DBS 테스트^{50, 51} 에 특히 적응의 성능 특성에 우수한 “나는 단계적 몇 가지 항 HIV 테스트의 결합된 사용과 절차”^17,52. “그들은, 실제로, 또한 초과 했다 특별히 개발 되었으며 DBS 있다 (Q 방지 HIV 1 + 2 DBS 키트)에서 항 HIV 항 체의 검출에 대 한 최적화 된 분석 결과의 성능 기록.” ^{17, 53}  

함께 찍은,이 통신에 포괄적인 단계별 프로토콜 가능 하 고 사용자 친화적인 도구를 준비 하 고 처리 하는 DBS 입증 하 고 따라서 진단 바이러스학에 안정적으로 사용할 수 있습니다. 그것은 자동화 ⁵⁴ 를 사용 하 여 접근을 허용 한다 고 우수한 성능 특성으로 인해 종류 DBS 실험실에서 테스트의 글로벌 분야에서 미래의 일반적으로 허용된 합의 프로토콜에 대 한 초석의 역할을 의학입니다.