Microscopia intravital Imagem do Fígado seguinte<em> Leishmania</em> Infecção: Uma Avaliação de hepáticas Hemodinâmica

Hemodinâmica específicos de órgãos são características fisiológicas importantes de qualquer órgão de mamíferos. Anormalidades no fluxo sanguíneo pode ser a consequência de inflamação e um sinal de disfunção de órgãos ^1. Assim, o fluxo de sangue organização, estrutura e função de parâmetros aparecem como críticos para análise sob condições fisiológicas e patológicas. As técnicas que têm sido normalmente utilizadas para a análise de fluxo sanguíneo em um órgão específico contêm várias limitações, incluindo o limite de resolução da técnica em si (por exemplo, o Doppler do fluxo de sangue), a capacidade para a medição de fluxo sanguíneo absoluto única (volume de sangue por unidade que serve um órgão) (por exemplo, a tomografia de coerência óptica) ea medição de mudanças médias em velocidade em uma população grande e heterogêneo de vasos sangüíneos ^2,3. Sistema circulatório do fígado liga diferentes subtipos de vasos que são heterogêneos em seu tamanho, estrutura e função. Dentroesta tecnologia de imagem estudo, microscopia intravital (IVM) é aplicado para avaliar a hemodinâmica do fígado in vivo, em tempo real, com elevada resolução e em paralelo para descobrir as características dos vasos sanguíneos individuais que formam o órgão hepático. O recente desenvolvimento desta técnica de imagem óptico potente permite ao pesquisador para coletar dados dinâmicos em animais vivendo em uma resolução espacial e temporal alta. Ao permitir a visualização direta e acompanhamento dos processos biológicos específicos e rápidos in vivo em tempo real, IVM fornece uma oportunidade única para que o pesquisador vasos sanguíneos imagem individual e medir e quantificar a velocidade de glóbulos vermelhos de solteiro (RBC) dentro de um especificamente selecionados embarcação hepática.

Neste estudo, nós implementamos a técnica de IVM no fígado do rato para investigar a influência da infecção do mouse pelo parasita Leishmania hepatotrópico sobre a hemodinâmica do fígado. L. donovanié o agente responsável pela leishmaniose visceral, uma doença grave caracterizada por respostas inflamatórias agudas-em-uma patologia crónica e que está presente em vários órgãos, incluindo o baço e o fígado. Num modelo de rato experimental de leishmaniose visceral, a infecção do fígado é auto-resolução enquanto que a infecção do baço é progressiva ^4. Estes resultados de infecção por Leishmania em relação aos órgãos individuais são ainda não completamente compreendidas. Investigação de hemodinâmica do fígado e baço em condições patológicas vai lançar uma nova luz sobre as interacções parasita-hospedeiro e patogênese da doença.

Nosso sistema modelo experimental é baseado em expor e imagiologia do fígado de um rato anestesiado que receberam injeção intravenosa de corantes fluorescentes específicos para a rotulagem do intravasculature hepática. O fígado é um órgão favorável para microscopia intra-vital. Depois de realizar uma pequena incision no abdômen, o fígado é suavemente exteriorizada e colocada sobre uma gaze molhada, em seguida, em uma lamela com o objetivo de reduzir quaisquer artefatos de movimento devido à pulsação e respiração. O fígado é então colocado dentro da visão de uma lente do microscópio. Em comparação com o baço e nó de linfa, que exigem a utilização de dois fotões para estudos de microscopia de IVM, a vantagem de o fígado reside na sua arquitectura homogénea 3D / anatomia, que permite o uso de um microscópio confocal convencional, com uma profundidade de penetração máxima de aproximadamente 50 mm, para microscopia intravital imagiologia ^5-8.

Este estudo descreve dois métodos de imagem independentes para a medição quantitativa da RBC velocidade e velocidade do fluxo sanguíneo nos vasos sanguíneos individuais. No primeiro método, o fluxo de sangue no fígado é adquirida utilizando um modo de bi-dimensional xy ao longo do tempo. Os dados XYT resultantes são analisados ​​usando o plugin MtrackJ no software livre ImageJ, que permite o rastreamento de individual hemácias ao longo do tempo. No segundo método, um único vaso sanguíneo é seleccionado e a sua correspondente fluxo de sangue é analisada utilizando o modo de varrimento de linha rápida aquisição do microscópio confocal de varredura a laser. O vaso de interesse é digitalizada de alta frequência ao longo do seu eixo central através de uma linha axial. A velocidade do fluxo de sangue é então quantificada com base na diferença de contraste entre eritrócitos não marcados escuras e plasma marcado por fluorescência. As intensidades de fluorescência de glóbulos vermelhos e plasma adquiridos ao longo da linha de varrimento são representados graficamente contra o tempo para obter estrias, os ângulos dos quais são proporcionais às velocidades de um RBC indivíduo.

O objetivo deste artigo é fornecer um método simples e reprodutível para a imagem latente e medir a velocidade do fluxo de sangue dentro dos vasos sanguíneos individuais do fígado e disponibilizar as ferramentas básicas para a realização bem-sucedida da cirurgia rato, IVM e análises quantitativas da velocidade de glóbulos vermelhos individuais. Tsua abordagem permitirá que os investigadores para ganhar novos insights sobre velocidade do sangue em condições patológicas.