Isolasjon og kultur av endotelceller fra Embryonale brain

Angiogenese, neurogenesis og neuronal migrasjon er kritiske hendelser i sentralnervesystemet (CNS) utvikling, reparasjon og regenerering. Flere elegante studier har vist at endotelceller stimulerer neuronal proliferasjon og vice versa ved frigivelse av løselige faktorer, og ved direkte kontakt. Vi har funnet det å vite at i mesteparten av disse studiene ^1-3, mens neuronale progenitorer / neurale stamceller isolert fra den embryoniske hjernen, er de cocultured med endotelceller fra den voksne hjernen, andre voksne vev kilder, eller med endotel-cellelinjer. Dette kan delvis skyldes de tekniske problemer forbundet med å isolere og dyrke rene populasjoner av endotelceller fra den embryoniske hjernen. Men, angiogenese, neurogenesis, og neuronal migrasjon er sammenfallende hendelser i størrelsesordener mer robust i den embryonale hjernen enn i den normale voksne hjernen. Den periventricular vaskulære nettverk av embryonic forhjerne (telencephalon) stammer fra et fartøy plassert i basalgangliene primordium og utvikler seg i form av en ordnet gradient fra ventral til dorsal telencephalon ved embryonisk dag 11 (E11) ^4,5. Dette plexus av fartøy av periventricular vaskulære nettverk er forskjellig fra pial fartøy basert på opprinnelse, anatomiske plassering, vekstmønster og utviklings regulering ^4,5. Retning av spredning av periventricular angiogenese gradient matcher telencephalic tverr neurogenetic gradient. Innenfor telencephalon, den periventricular angiogenese gradient og gradient av GABA nevroner trekkende tangentielt lapper romlig samt ^seks. Med hensyn til timing, er angiogenese gradient i forkant av neurogenetic gradient og GABA nevron gradient med om lag en dag. Dermed periventricular endotelceller er romlig og tidsmessig godt posisjonert for å gi kritiske pekepinner for å støtte telencephalic neurogenesis ogneuronal migrasjon ^4,6. Derfor vil bruk av embryonale periventrikulær endotelceller i coculture eksperimenter med neuronal stamceller og / eller nerveceller gir et gunstigere modell for å studere interaksjoner neurovascular og utvikle nye muligheter for behandling av nevrodegenerative sykdommer eller ischemisk / traumatisk hjerneskade.

Vi understreker viktigheten av å fjerne pial membran, ikke bare for å begrense epitelcelle forurensning, men også for å skille pial endotelceller som er molekylært og funksjonelt forskjellig fra endotelceller i periventricular vaskulære nettverk ^4,6 (betegnes PVECs å skille fra pial egenkapitalbevis) . Her beskriver vi den metoden som vi rutinemessig bruk i vårt laboratorium for å få en rik og ren utbytte av PVECs. Disse endotelcellene er fremstilt fra embryoniske forebrains isolert fra en enkelt tidsstyrt-gravide mus. De kan bli utvidet, subkultiveres, og frosset ned med hell for fremtidig bruk.