为检验新型抗病毒药物的鉴定对蓝舌病病毒

BTV是一个原型双链RNA病毒属中的环状病毒 ， 呼肠弧病毒家族。 BTV是家畜中最重要的疾病，包括绵羊，山羊，牛等家畜之一，与世界各地的^1,2 $ 3十亿/年亏损。异国情调的BTV血清型是在上市的重要动物病原体“美国农业部的严重后果家畜病原体。”重新出现的BTV的最近，已经引起疾病的牛大爆发和羊在整个北欧^3,4几个国家。作为其经济意义的结果，作为一个模型系统，BTV已经成为广泛的分子，遗传和结构研究的主题，并且几种疫苗已经开发出来。然而，由于缺乏适当的检测对抗病毒药物的发现，有没有可用的对抗BTV抗病毒药物。

在最近的高通量筛选（HTS）活动使用BTV作为模型系统，我们ðeveloped，优化和验证一个基于CPE的检测，以确定对虫媒病毒⁵潜在的广谱抗病毒药物。基于CPE的测定是，已在抗病毒的药物发现对许多病毒诱导快速和可观察到的CPE /凋亡^5-7被用于一个公认的测定。在我们的系统，北京电视台后感染，CPE是显而易见的脊椎动物细胞，包括海拉，BSR和HEK 293T ^8。 BTV-诱 ​​导的CPE可以监测和量化使用各种细胞活力的检测方法，包括的CellTiter格洛细胞活力试剂盒（试剂盒^CTG）9。该试剂盒确定基于对细胞内ATP的定量在培养的活细胞的数目呈现，这标志着代谢活跃的活细胞的存在。在优化条件下，这里提出的基于CPE的检测表明其可行性与“混合和计量”一步到位的协议，并与稳定的荧光信号的灵活性。同时，有毒化合物热度庆安细胞活力将被排除在这个基于CPE的检测。在基于CPE的检测表明其稳定性和抗病毒的药物发现对抗BTV的可靠性，并且已经用于筛选NIH的分子库的小分子库（MLSMR），从而导致潜在的抗病毒铅化合物（次六个新集群的识别^）5。

当一个潜在的抗病毒化合物中已使用基于CPE测定法确定，这将需要经受10浓度的剂量-反应实验来确定抗病毒活性和细胞毒性²的范围内。的抗病毒效力，表示为50％抑制浓度（IC _50）或50％有效浓度（EC _50），是一种药物，其抑制基线和最大之间病毒诱导的CPE的中途的浓度。抗病毒药物的细胞毒性， 即 50％的细胞毒性浓度（CC _50），是浓度的药物诱导的基线值和最大值之间的细胞毒性的50％。选择性指数（SI），记为50％的SI（SI _50）从CC ₅₀ / IC _50，它确定对病毒诱导的CPE抗病毒的特异性来计算。该IC _50（或EC _{50），CC 50}和SI ₅₀值是至关重要的措施，以确定抗病毒化合物是否是有效的和有选择性的进行进一步的药物开发。

当一种抗病毒药表明没有明显的毒性在体外 ，还防止了病毒诱导的CPE和生产性病毒的生命周期，它以表征其农业部²是重要的。我们通过开展ToA的检测，以确定病毒的生命周期是受抗病毒的可能（S）步实施这种表征。通常，抗病毒化合物加入到细胞中在不同的时间前或后病毒感染。如果抗病毒药物加入到被感染的细胞中张贴到其目标STEP感染的过程中，它比较时向其中添加之前的步骤中的人会导致较低的活性。因此，ToA的研究是一种用于确定化合物的抗病毒效力，其潜在目标的关键，无论是在病毒的生命周期或参与病毒生命周期的宿主机器。

对于所有三个实验，细胞存活率用CTG套件下列制造商的指示⁵确定。该检测系统输出，可以使用不同的内部软件进行分析，充分的发光信号。每个测定的至少一式三份用8副本进行验证和执行。对于所有获得的数据，三个参数，包括平均值（AVE），标准偏差（STDEV），和共同有效的变化（CV）进行分析，以确定检测的鲁棒性。一次测定的鲁棒性进行了测定，将数据进行进一步的分析，以及使用各种生物统计学和图形化绘制C工具^2。