Summary

コンピュータ支援多電極パッチクランプシステム

Published: October 18, 2013
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Summary

多電極パッチクランプ記録は、複雑なタスクを構成する。ここでは、実験的な手順の多くを自動化することによって、それがパフォーマンスと録音の数の質的向上につながるプロセスを加速することが可能であるか、を示します。

Abstract

パッチクランプ技術は、個々のニューロンまたはそれらの細胞内区画からの電気的活動を記録するための最もよく確立された方法今日。それにもかかわらず、安定した記録を実現し、さらには個々の細胞から、かなりの複雑さの時間のかかる手順のままである。効率的な情報の表示に関連して多くのステップの自動化が大幅に高い信頼性で録音のより多くを実行する際にし、短い時間で実験研究を支援することができます。大規模な記録を達成するために、我々は、最も効率的なアプローチは、プロセスを完全に自動化することなく、効率的に実験者の経験と視覚的なフィードバックを取り入れながら実験工程を簡素化し、ヒューマンエラーの可能性を低減することはないと結論付けた。念頭に置いてこれらの目標によって私達は、commercを単一のインターフェースでの多電極パッチクランプ実験のために必要なすべてのコントロールを集中コンピュータ支援システムを開発コンピュータの画面上での実験に関連する情報や指導の手がかりを表示しながら、ially利用可能なワイヤレスゲームパッド。ここでは、私たちは、記録設定を達成するために必要な時間を短縮し、実質的に正常に同時に多数のニューロンを記録する機会を増加させ、システムの異なる構成要素を記載している。

Introduction

マイクロメートルの精度で複数のサイトを記録し、刺激する能力は、実験的にニューロン系のより良い理解を達成するために極めて有用である。多くの技術がこの目的のために開発されてきたが、いずれも閾値下の活性および個々のシナプス後電位を研究するための必須のパッチクランプ技術によって達成さsubmillivolt分解能を、許可しない。ここでは、同時に記録し、神経の接続性の研究のために十分な精度で個々の細胞の大多数を刺激することを目的とした十二極コンピュータ支援パッチクランプシステムの開発を覆う。多くの他の用途は、このようなシステムのために考えられるが、ニューロンのグループ内の可能な接続の数は、問題のニューロンの数の二乗に比例して成長することを考えるとシナプス接続の研究に特によく適している。したがって、三つの電極を備えたシステムは、テストを可能にしながら、最大6つの接続が発生すると、ほとんどの場合、12ニューロンを記録し、単一の1を記録するには、最大132の接続が発生することをテストして、頻繁にします( 図1)1ダース以上を観測することができます。接続の数十の観察は、同時に小規模ネットワークの構成を分析し、そうでなければ1をプローブすることができないネットワーク構造の統計的特性を推測することができる。また、数々の細胞の正確な刺激はまたシナプス後細胞2の募集の定量化を可能にする。

Protocol

1。機器の準備 コンピュータからの制御マニピュレータ シリアルポート(RS-232)を介してコンピュータに各マイクロマニピュレータコントローラボックスを接続します。 クエリを実行し、シリアルポートを経由して送信されるように設定を調整、位置決めのためのコマンドを実装。指定された速度とハードウェアの互換性の問題は、C / C + +は、プログラミン…

Representative Results

上記の方法に従って、我々はほぼ同時に神経細胞の数が最も多いパッチクランプ、これまでに倍増、同時に最大12のニューロンの細胞全体の記録を行うことに成功しました。ラットの体性感覚皮質のV層に記録された錐体細胞間の直接的なシナプス結合のネットワークの例を図6に示す。 所与の細胞型のための体間の距離の関数として接続確率プロファイルの?…

Discussion

即時の質問は、通常我々が説明した手順の成功率に関する生じる。高い成功率のための準備が不可欠です。ピペットは、記録された細胞の人間のために適切である先端開口部を持っている必要があります。詰まっピペットを避けるために、細胞内液をろ過することも重要です。非常にきれいで、新鮮に引っ張っピペットは別の要件である。二項分布は、これらの問題は、最終的な収量にどの?…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

我々は、パッチクランプ手順の自動化のための改善に有益なアドバイスをギラッドシルバーバーグ、ミケーレピニャテッリ、トーマス·K·バーガー、ルカGambazzi、およびソニア·ガルシアに感謝したいと思います。我々は、ソフトウェア実装と、貴重なアドバイスと支援をRajnishランジャンに感謝します。この作品は、EUのシナプスプロジェクトで、一部は人間のフロンティア·サイエンス·プログラムによって部分的に資金を供給された。

Materials

Microscope Olympus BX51WI 40X Immersion Objective
Manipulators Luigs & Neumann SM-5 Serial protocol used
Amplifiers Axon Instruments MultiClamp 700B SDK used
Camera Till Photonics VS 55 BNC analog output
Framegrabber Data Translation DT3120 SDK used
Oscilloscopes Tektronix TDS 2014 Serial communication
Data acquisition InstruTECH ITC 1600
Data acquisition National Instruments PCI-6221 Library used (.dll)
Pressure valve SMC SMC070C-6BG-32
Pressure sensor Honeywell 24PCDFA6G
Membrane pump Schego Optimal

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Cite This Article
Perin, R., Markram, H. A Computer-assisted Multi-electrode Patch-clamp System. J. Vis. Exp. (80), e50630, doi:10.3791/50630 (2013).

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