神经电路记录从一个完整的蟑螂神经系统

1。解剖在本协议中使用的蟑螂生理盐水溶液具有下列组成： 蟑螂生理盐水溶液36：（克为100ml）中 210 mM氯化钠（1.227克） 2.9毫米氯化钾（0.0216克） 1.8毫米氯化钙2（0.0265克） 0.2毫米的NaH 2 PO 4•2H 2 O（0.0032克） 1.8毫米的Na 2 HPO 4•7H 2 O（0.0483克） （pH值7.2。调节pH，用1M的NaOH或1M的HCl）。 选择雄性蟑螂从贮水箱，具有强大的尾叶（ 图1）。相比于女性的男性的最后段狭窄，且不含卵巢和卵子的质量，男性更容易剖析。 P的男性美洲有一对尾叶之间的短测针。这些测针未在女性观察。 切断翅膀，腿和头脚的身体，腹面朝上，以二SH内衬有机硅弹性体。 用钳子拿起腹板和他们剪除用细剪刀，开始在后端和工作向前。总是用生理盐水保持内脏湿润，同时试图保持尾叶干。人们可以使用蜡或橡胶件定位在腹部向上，以防止盐水浸湿的尾叶。如果他们不被淋湿，干他们用一张纸巾。推到一边内脏和白质（脂肪体）。 VNC的是在该领域的中心，运行腹部的长度，并且应该有光泽的气管之间可见。神经索是半透明的，并且最初可能很难看到，直到照明的适当调整（ 图2）。不处理VNC用镊子或昆虫针，而是用玻璃探头操纵它。 清除动物的气管系统尽可能最佳的用钳子神经线和一对精美的玻璃制品需要LES，非常仔细地分裂VNC连接词A6和A5或A5和A4神经节（ 图3）纵向之间。底座上的尾叶和腹部向上出盐水浴缩短昆虫标签和蜡或有机硅弹性体，可以以适合的制剂（ 图4A和B）的一个楔形的。要格外小心，在过去的腹节不损坏该项目进入神经 ​​节的神经塞卡尔（ 图2D和5）。 2。细胞外记录解剖的制备，显微镜，和记录装置应该设置一个法拉第笼内，以阻止外部，特别是交流电源，电场可以重写信号从神经元（ 图6）。 放置显微镜，使其俯瞰显微镜载物台。一旦该制剂放置在台上，调节高强度照明光束的位置对于它的最佳视觉效果。 交流/直流差动放大器连接到集成数据记录单元（具体硬件和软件设置的详细信息之前已经描述了25）。头阶段保持抽吸电极应连接到放大器。银地线已涂有Cl -的插入更稳定的记录腹部的结果。其原因是，如果在体腔中的溶液不与在盘的浴液接触，以保持接地的记录电极相关联的流体。 录制频率设置为4千赫。设定电压量程（y轴）为500 mV（这可以被调整以优化轨迹的可视化）。运行该录音软件在连续或示波器模式，以响应刺激记录神经活动。 切VNC连接词接近A5的一个，然后将切口端连接到A6成吸电极。请务必为pULL生理盐水吸吸电极在神经前盖里面的银线。 上到位于每个尾须毛干吸管吹空气。看是否刺激对尾须同侧的毛发所记录的连通性提供了比健侧一个不同的反应。采取的响应的幅度和峰值在刺激过程中给定时间间隔的数量的注释。 将吸电极的塞卡尔神经进行录制。为了获得更好的贴合，​​开关电极尖端与一个较小的开口，如果必要的。 切塞卡尔神经接近A6，然后吸了通向尾须神经。应该有动作电位的自发放电。现在，吹气到尾须，并注意反应。 3。电刺激感觉神经，以确定招聘改变录音软件扫模式，这样它记录的痕迹（100-500 MSE角），每次刺激触发。 刺激电极连接，刺激器的输出。 与两个小钩引线或片段连接的刺激电缆。 从激励器输出的BNC触发器连接到所述记录装置上的触发输入。 下面的刺激参数应该唤起反应：持续时间：0.3秒;延迟：10毫秒;频率：1赫兹，电压：根据需要在录音得到的信号调节（刚刚超过阈值，并能够获得的最大响应）。我们没有理由去电压高于最大阈值高得多招聘作为一个高电压可损坏的神经。 切塞卡尔神经的末梢尽可能使长期神经根可拉成的刺激吸引电极（ 图7，箭头）。可用于A6和A5或另一段更前壁之间的连通。 设置录音吸电极，因此您可以PULL了切连通到电极。一定要拉一些生理盐水吸吸电极在神经前盖里面的银线。确保刺激电极也接地在洗澡液（在靠近A3腹部是理想的）。 提供了一系列单一的刺激增加电压，直到动作电位出现在屏幕上。每个人都应该做的最小激励电压和持续时间的记录招募的响应。增加强度，直到连接词一个突触反应观察。从巨轴突的大穗（外接入点）先出现，然后其他较小的AP的也可以观察到。