Bepaling van de toelaatbare vetzuren en Cholera toxine Concentraties behulp Human Intestinal epitheelcellen en BALB / c muis macrofagen
Summary
We stellen om aanvaardbare concentraties van drie vetzuren (oliezuur, linolzuur en linoleenzuur) en cholera toxine dat niet significant en negatief effect hadden op overleving van de cel door oplossen van de vetzuren en de toxine en het gebruik ervan in de overleving van de cel assays bepalen.
Abstract
De positieve rol van vetzuren in de preventie en verlichting van non-humane en humane ziekten werden en uitgebreid gedocumenteerd. Deze rollen zijn invloeden op infectieuze en niet-infectieuze ziekten, zoals het voorkomen van ontsteking en mucosale immuniteit tegen infectieziekten. Cholera is een acute intestinale ziekte veroorzaakt door de bacterie Vibrio cholerae. Het komt voor in ontwikkelingslanden en indien onbehandeld, kan leiden tot de dood. Terwijl voor cholera vaccins bestaan, zijn ze niet altijd effectief en andere preventieve methoden nodig. We stellen om aanvaardbare concentraties van drie vetzuren (oliezuur, linolzuur en linoleenzuur) en cholera toxine met de muis BALB / C macrofagen en humane intestinale epitheelcellen, respectievelijk bepalen. We oplosbaar bovengenoemde vetzuren en gebruikt celproliferatie assays om de concentratie trajecten en specifieke concentraties van de vetzuren die niet vastt schadelijk voor de menselijke intestinale epitheliale cellevensvatbaarheid. We oplosbaar choleratoxine en gebruikt in een test om de concentratie trajecten en specifieke concentraties van choleratoxine die statistisch cellevensvatbaarheid doen afnemen in BALB / C macrofagen bepalen.
We vonden de optimale vetzuur concentraties tussen 1,5 ng / ul, en die van cholera toxine <30 ng per behandeling. Deze gegevens kunnen toekomstige studies die tot doel hebben een beschermende mucosale rol van vetzuren in de preventie of verlichting van cholera infecties te helpen.
Introduction
De gezondheidsvoordelen van vetzuren, zoals oliezuur, linolzuur en linoleenzuur werden en worden gedocumenteerd. Bijvoorbeeld, oliezuur helpt penetratie van lipofiele geneesmiddelen in het lichaam 1,2 vergemakkelijken vermindert coronaire hartziekte met 24% wanneer gelezen verzadigde vetzuren 3 en wordt gebruikt om metabolische ziekten zoals Adrenoleukodystrophy 4 is een X-gebonden behandelen erfelijke aandoening van vetzuurmetabolisme. . Terwijl een noodzakelijke voorloper arachidonzuur in zoogdieren, linolzuur (in tegenstelling oliezuur) niet wordt gesynthetiseerd door het lichaam en moet door externe bronnen zoals lijnzaad consumptie door 5 Studies geven verschillende gezondheidsvoordelen van linolzuur zoals: anti-aging eigenschappen voor de huid; 6 anti-inflammatoire eigenschappen; 7 verminderde proliferatie van colorectale en prostaatkanker cellen; 8 en de mogelijkheid om obesitas te bestrijden en promotie of cardiovasculaire gezondheid. 9 linoleenzuur speelt een rol bij het verminderen van periodontale ontsteking, 10 en moduleren tromboxaan en prostacycline biosynthese. 11
Arpita 12 onderzocht de invloed van gal vetzuren en cholesterol op V. cholerae 's expressie van virulentiefactoren en de beweeglijkheid. Yamasaki 13 aangegeven dat methanol extract van rode chili pepers, en andere natuurlijk gewonnen verbindingen, cholera toxine productie potentieel kunnen verlagen. Het is denkbaar om het gebruik van voedingsmiddelen die rijk zijn in de bovenstaande vetzuren (zoals lijnzaad) bij de preventie en verlichting van infectieziekten zoals cholera door het verstrekken van mucosale immuniteit onderzocht. We onderzoeken verricht om vetzuren te solubiliseren en zou op basis van celproliferatie assays, de maximale concentratie van vetzuren die menselijke intestinale epitheliale cellen kan verdragen zonder nadelige gevolgen cell levensvatbaarheid. We veronderstelden dat oliezuur, linolzuur en linoleenzuur verschaffen een gunstig effect op de levensvatbaarheid van cellen bij lagere concentraties, maar bij hogere concentraties zij toxisch voor de cellen is. Ook oplosbaar choleratoxine en bepaald de maximale concentratie van cholera toxine dat BALB / C muizen macrofagen kan verdragen zonder significant in cellevensvatbaarheid. Onze hypothese is een toxisch effect van cholera toxine op levensvatbaarheid van de cellen, zelfs bij zeer lage niveau. Werkwijze solubiliseren een cholera toxine en te gebruiken om de maximale hoeveelheid van het toxine dat de cellen kunnen tolereren zonder significant in overlevingsvermogen bepalen een voordeel voor toekomstige studies. Bijvoorbeeld kan een combinatie van de bovenstaande methoden worden bepaald of vetzuren cellen te voorzien van mucosale immuniteit tegen cholera infecties. Om het beste van onze kennis, is dit rationeel en methodiek niet onderzocht.
Wij discuss hoe onze voorlopige gegevens kunnen worden gebruikt in latere onderzoeken om te bepalen of oliezuur, linolzuur en linoleenzuur cellen te voorzien van mucosale immuniteit tegen cholera-infectie.
Protocol
Representative Results
Discussion
Suggestie van de concentratie van vetzuren en Cholera toxine
Hoewel het exacte mechanisme hoe de vetzuren mucosale immuniteit bekend, hebben verschillende studies geprobeerd om de positieve effecten te onderzoeken. Onze studie beoogt methode aan de maximale concentratie van vetzuren die cellen evenals de maximale concentratie van cholera toxine kan tolereren cellen kunnen verdragen zonder een significante invloed op celoverleving te bepalen.
Om de concentratie van d…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Wij danken Paula Cobos en Dr Evros Vassiliou voor lab bijstand en het verstrekken van de muis macrofagen, respectievelijk. We ons lab manager Richard Criasia danken ook voor begeleiding en hulp met materialen. Tot slot, de auteurs danken Ramanpreet Kaur voor hulp bij videoproductie.
Materials
| Cells/Reagent | |||
| Mus musculus macrophages | ATCC | ATCC RAW 264.7 | |
| Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium | ATCC | 30-2002 | |
| L-glutamine | ATCC | 30-2115 | |
| Fetal bovine serum | Bio-west | S0250 | |
| Antibiotic/antimycotic | Hyclone | SV3007901 | |
| Human intestinal epithelial cells | ATCC | ATTC CCL-241 | |
| HybriCare media | ATCC | 46-X | |
| Oleic Acid | Sigma-Aldrich | O1008 | |
| Linoleic Acid | Sigma-Aldrich | L-1376 | |
| Linolenic Acid | Sigma-Aldrich | L-2376 | |
| Cholera toxin | Sigma-Aldrich | C8052 | |
| Equipment | |||
| BD Falcon 96-Well Cell Culture Plates | BD Biosciences | 351172 | |
| Spectrophotometer with Dynex Revelations 4.22 software | Dynex | 91000101 |
References
- Franceur, M. L., Golden, G. M., Potts, R. O. Oleic Acid: Its effects on stratum corneum in relation to (trans) dermal drug delivery. Pharm Res. 7 (6), 621-627 (1990).
- Tandon, P., et al. X-ray diffraction and spectroscopic studies of oleic acid-sodium acetate. Chem. Phys. Lipids. 109 (1), 37-45 (1990).
- Kris-Etherton, P. M. The debate about n-6 polyunsaturated fatty acid recommendations for cardiovascular health. Journal of the American Diabetic Association. 110 (2), 201-204 (2010).
- Rizzo, W. B., Phillips, M. W., et al. Adrenoleukodystrophy: dietary oleic acid lowers hexacosanoate levels. Annals of Neurology. 21 (3), 232-239 (1987).
- Bozan, B., Temelli, F. Chemical composition and oxidative stability of flax, safflower and poppy seed and seed oil. Bioresource Tech. 99, 6354-6359 (2005).
- Krein, S., Meldurm, H., Hawkins, S., Foy, V. Clinical benefits of conjugated linoleic acid to 3-dimensional wrinkle morphology. J. American Academy of Dermatology. 60 (3), AB30 (2009).
- Yu, Y., Correll, P. H., Heuvel, P. J. Conjugated linoleic acid decreases production of pro-inflammatory products in macrophages: Evidence for a PPARy dependent mechanism. Biochimica et Biophysica Acta. 1581 (3), 89-99 (2002).
- Palombo, J., Ganguly, A., Bistrian, B., Menard, M. The anti-proliferative effects of biologically active isomers of conjugated linoleic acid on human colorectal and prostatic cancer cells. Cancer Letters. 177, 163-172 (2002).
- Granda, M., Sinclair, A. J. Fatty acids and obesity. Current Pharm. Design. 15 (36), 4117-4125 (2009).
- Rosenstein, E., Kushner, L., Kramer, N., Kazandjian, G. Pilot study of dietary fatty acid supplementation in the treatment of adult periodontitis. Prostaglandins, Leukotrienes and Essential F.A. 68 (3), 213-218 (2003).
- Ferretti, A., Flanagan, V. Antithromboxane activity of dietary alpha-linolenic acid: a pilot study. Prostaglandins Leukot. Essent. Fatty Acids. 54 (6), 451-455 (1995).
- Arpita, C., Pradeep, K. D., Chowdhury, R. Effect of Fatty Acids and Cholesterol Present in Bile on Expression of Virulence Factors and Motility of Vibrio cholera. Infection and Immunity. 75 (4), 1946-1953 (2007).
- Yamasaki, S., Asakura, M., Neogi, S. B., Hinenoya, A., Iwaoka, E., Aoki, S. Inhibition of virulence potential of Vibrio cholerae by natural compounds. Indian J. Med. Res. 133 (2), 232-239 (2011).
- Hendriksen, R. S., Price, L. B., et al. Population Genetics of Vibrio cholerae from Nepal in 2010: Evidence on the origin of the Haitian outbreak. mBio. 2 (4), 1-6 (2011).
- Schaeffler, A., Gross, P., et al. Fatty acid-induced induction of Toll-like receptor-4/nuclear factor-kappa B pathway in adipocytes links nutritional signaling with innate immunity. Immunology. 126 (2), 233-245 (2009).
