ماوس نموذج مثلي من سرطان الغدة الدرقية كشمي
Summary
يوصف جيل من نموذج الفأر مثلي من سرطان الغدة الدرقية كشمي هنا. هذه التقنية توظف التنسيب الجراحية للكشمي خلايا سرطان الغدة الدرقية الإنسان في الغدة الدرقية من الفئران العوز المناعي، وبالتالي خلق بيئة أكثر سريريا ذات الصلة لدراسة تطور المرض وكذلك شاشة التدخلات العلاجية المبتكرة.
Abstract
وقد أنشئت عدة أنواع من نماذج حيوانية من سرطان الغدة الدرقية الإنسان، بما في ذلك تحت الجلد طعم أجنبي وزرع مثلي من الخلايا السرطانية في الفئران العوز المناعي. كانت تحت الجلد نماذج طعم أجنبي قيمة لفحص ما قبل السريرية وتقييم العلاجات علاجية جديدة. هناك عدد من المزايا لاستخدام نموذج تحت الجلد؛ 1) السريع، 2) قابلة للتكرار، و3) إنشاء الورم، والنمو، واستجابة لعوامل علاجية يمكن رصدها عن طريق التفتيش البصري. ومع ذلك، أدلة قوية وتسليط الضوء على مجيء قصيرة من تحت الجلد طعم أجنبي نماذج 1-3. على سبيل المثال، والعلاجات الطبية مما يدل الخصائص العلاجية في نماذج طعم أجنبي تحت الجلد غالبا ما يكون لها تأثير ملحوظ على الأمراض التي تصيب البشر. المكروية للموقع من زرع أو حقن xenographic يكمن في قلب هذا الاختلاف.
مثلي نماذج طعم أجنبي الورم توفير المزيد من المواالسياق gically ذات الصلة التي لدراسة المرض. مزايا زرع الخلايا المريضة أو الأنسجة في ما يعادلها الأصل التشريحية داخل الحيوان المضيف يتضمن موقع مناسب للتفاعل ورم المضيف، وتطوير الانبثاث الأمراض ذات الصلة والقدرة على دراسة تأثير مواقع محددة على العلاجات العلاجية الفحص. ولذلك، نماذج طعم أجنبي مثلي تؤوي قيمة أكثر بكثير السريرية لأنها تتكاثر بشكل وثيق الأمراض التي تصيب البشر. لهذه الأسباب، قد اتخذت عددا من الجماعات الاستفادة من نموذج سرطان الغدة الدرقية مثلي كأداة بحث 4-7.
هنا، نحن تصف النهج الذي يؤسس نموذج مثلي لدراسة سرطان الغدة الدرقية كشمي (ATC)، والذي هو الغازية للغاية، وتقاوم العلاج، ومميت تقريبا في جميع المرضى الذين شخصت. وتعد الخلايا ATC مثقف وتعليق الخلوية فصلها في محلول يحتوي على مصفوفة الغشاء القاعدي. حجم صغير ببطء وينجected في حق الغدة الدرقية. يتم مراقبة المظهر العام وصحة الفئران لضمان الحد الأدنى من مضاعفات ما بعد الجراحة وقياس انتفاذ المرضية للسرطان. يتم التضحية الفئران في 4 أسابيع، ويتم جمع الأنسجة للتحليل النسيجي. يمكن أن تؤخذ الحيوانات في وقت لاحق نقاط الوقت لدراسة أكثر تقدم مسبقا من المرض. إنتاج هذا نموذج الفأر مثلي يؤسس منبرا أن يحقق هدفين: 1) زيادة فهمنا لعلم الأمراض ATC، و 2) شاشة العوامل العلاجية الحالية والمستقبلية للفعالية في مكافحة ATC.
Protocol
Representative Results
Discussion
في نموذجنا، أظهرت الحيوانات الغدة الدرقية ورم خبيث ورم والأمراض المرتبطة الضائقة دنف والجهاز التنفسي بنسبة 4 أسابيع بعد الحقن. كما هو الحال مع معظم النماذج الأخرى مثلي الاستفادة التسليم عن طريق الحقن من تعليق خلية، الحقن في الأنسجة المحيطة بها وبعد الحقن تسرب أن ينتشر ما وراء الهدف ممكنة. مع أن يقال، واحد غير معروف المحتملة التعرف ينتجها هذا الإجراء هو تأثير التعرض الهدف قبالة لالانبثاث أو مضاعفات غير مرض. هذا هو مصدر قلق عام مع معظم عمليات زرع xenographic، بغض النظر عن يجري التحقيق المرض. ومع ذلك، عواقب غير مقصودة من ورم خبيث يمكن التقليل بشكل كبير من خلال ضمان شطبة كامل من طرف الإبرة قد اخترقت الغشاء تتراكب بشكل مريح الغدة الدرقية وطرد ببطء تعليق الخلوية. إذا لوحظ تسرب أثناء أو بعد الحقن، قد يتم حذف تلك الحيوانات من الدراسة.
<p cمعشوقة = "jove_content"> ومن الضروري أن الحيوانات و perfused قبل حصادها الغدة الدرقية / القصبة الهوائية والأنسجة الأخرى. يتم الاحتفاظ فوائد هي ذات شقين، 1) يتم إزالة خلايا الدم الحمراء ولن تحدث فوضى في العينات النسيجية و2) مورفولوجيا الأنسجة وسلامة. وعلاوة على ذلك، مستأصل الغدة الدرقية / القصبة الهوائية التي لديها إما كتلة رمي تعلق أو مدفون في داخلها يجب أن تقطع بطريقة المعالم التشريحية يمكن تحديدها قبل أن يتم جزءا لا يتجزأ من لإعداد النسيجية. وهذا سوف يقلل بشكل كبير الوقت اللازم لإعداد العينة.في هذا التقرير وصفنا النمو المحلي وغزو المتقدمة ورم الغدة الدرقية بعد حقن مثلي من الخلايا ATC. ATC ورم خبيث قد يتم التحقيق من خلال تحليل التحضيرات النسيجية من الأنسجة الأخرى باستخدام البقع النسيجية القياسية، مثل الهيماتوكسيلين ويوزين، أو عن طريق استخدام الخلايا المناعية أو علامات علم الأمراض ذات الصلة. هذا النظام يمكن تطويرها من قبل زتعديل enetically خلايا سرطان الغدة الدرقية مع الصحفيين مضان بحيث التصوير الحي يمكن أن تستخدم لرصد الانبثاث وفعالية من العلاجات العلاجية.
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
فإن الكتاب أود أن أشكر الدكاترة. ون جيون لى ودانيال Kreisel (مدرسة الطب بجامعة واشنطن في سانت لويس) لمساعدتها في تدريب الجراحة. ويدعم RYL من قبل المعاهد الوطنية للصحة منح R01 DK068057 وصندوق أبحاث الرئيس من جامعة سانت لويس.
Materials
| Name of Reagent/Material | Company | Catalogue Number | Comments |
| RPMI 1640 cell culture media | Mediatech | 10-041-CV | Media and additives used depend on cell line |
| TC10 Automated Cell Counter | Bio-Rad | 145-0001 | |
| Matrigel | Becton, Dickinson and Company | 354234 | |
| Graefe Forceps, Serrated; Slight Curve, 4″ | Roboz | RS-5135 | |
| Disposable scalpel, No. 15 | Feather | 2975#15 | |
| Olsen Hegar Needle Holder – 4 ½” delicate serrated | gSource | gS 21.5400 | |
| 6-0 nylon black monofilament suture | Surgical Specialties Corporation | 1279B | |
| Heating Pad, reusable, 8″ x 12″ | |||
| Cloth tape, 1″ X 10 yds | Medline | MIINON260101 | For restraining anesthetized mouse |
| Peanut Clipper/Trimmer | Wahl | 8655 | For removing hair from surgical site |
| ChlorHex-Q SCRUB 2% | Penn Veterinary Supply | VED1222 | |
| Betadine | Henry Schein Company | 6906727 | |
| Petrolatum ophthalmic ointment | Dechra Veterinary Products | 17033-211-38 | |
| 2 x 2 gauze, 12-ply | Butler Animal Health Supply | 6936 | |
| Sterile Field, Barrier, 18″ x 26″ | Busse | 696 | |
| Drapes (CSR Wrap) | Cardinal Health | AT 21 412 | |
| 27G ½” needle | Becton, Dickinson and Company | 309623 | |
| 31G 5/16″ needle | Becton, Dickinson and Company | 328438 | |
| Ketamine (9 mg/ml) / xylazine (1 mg/ml) solution | |||
| Triple antibiotic ointment |
References
- Bibby, M. C. Orthotopic models of cancer for preclinical drug evaluation: advantages and disadvantages. Eur. J. Cancer. 40, 852-857 (2004).
- Hoffman, R. M. Orthotopic metastatic mouse models for anticancer drug discovery and evaluation: a bridge to the clinic. Invest. New Drugs. 17, 343-359 (1999).
- Killion, J. J., Radinsky, R., Fidler, I. J. Orthotopic models are necessary to predict therapy of transplantable tumors in mice. Cancer Metastasis Rev. 17, 279-284 (1998).
- Kim, S., et al. An orthotopic model of anaplastic thyroid carcinoma in athymic nude mice. Clin. Cancer Res. 11, 1713-1721 (2005).
- Nucera, C., et al. A novel orthotopic mouse model of human anaplastic thyroid carcinoma. Thyroid. 19, 1077-1084 (2009).
- Todaro, M., et al. Tumorigenic and metastatic activity of human thyroid cancer stem cells. Cancer Res. 70, 8874-8885 (2010).
- Tran Cao, H. S., et al. Real-time imaging of tumor progression in a fluorescent orthotopic mouse model of thyroid cancer. Anticancer Res. 30, 4415-4422 (2010).
- Marlow, L. A., et al. Detailed molecular fingerprinting of four new anaplastic thyroid carcinoma cell lines and their use for verification of RhoB as a molecular therapeutic target. J. Clin. Endocrinol. Metab. 95, 5338-5347 (2010).
- Nehs, M. A., et al. Late Intervention with anti-BRAF (V600E) therapy induces tumor regression in an orthotopic mouse model of human anaplastic thyroid cancer. Endocrinology. 153, 985-994 (2012).
- Nucera, C., et al. Targeting BRAFV600E with PLX4720 displays potent antimigratory and anti-invasive activity in preclinical models of human thyroid cancer. Oncologist. 16, 296-309 (2011).
