Vinculación de riesgo de depredación, Estrés Fisiológico herbívoro y descomposición microbiana de los desechos de las plantas

1. Grasshoppers cría bajo tensión y estrés Condiciones gratis Utilice circular 0,5 m 2, mesocosmos cerrados para prevenir la emigración o la inmigración de especies animales (Figura 1). Construir mesocosmos utilizando longitudes de 2,4 m de 1,5 m de altura ¼ "cerca de malla de aluminio como un andamio. Cubra la esgrima con 2,5 m de largo 1,75 m de altura cribado ventana de aluminio plegada sobre la parte superior e inferior de la esgrima y grapadas a lo largo de veces. Únete a la esgrima extremos para formar un círculo cerrado y grapado la ventana de superposición de cribado para crear un sello. Ajuste el mesocosmos en el suelo en el terreno por excavar unos 10 cm de profundidad por 4 cm de ancho foso alrededor de la base del mesocosom, se hunden en el mesocosmos la zanja y luego apisonar el césped de la zanja alrededor de la parte hundida del mesocosmos. Staple una pieza circular de investigación de la ventana a la parte superior del mesocosmos. Mesocosmos matriz en una replica desig emparejado experimentalN en el campo. Ubicaciones parcela debe ser seleccionado para que coincida con la identidad de la especie vegetal y cobertura en planta. Fregadero jaulas de 10 cm en el suelo en el lugar de parcela. Utilizando una red de barrido, recoja los primeros (2 ª) instar ninfas de saltamontes y almacenarlos en los mesocosmos con densidades naturales de campo. Utilizando una red de barrido, la captura de individuos de una dominante sentarse y esperar la caza (no web tejido) araña especies de depredadores. Cola cerró la araña quelíceros (piezas bucales utilizados para someter a presas) con cemento rápido a efectos de riesgo desconectados de la selección actual favorece la supervivencia saltamontes individuales con mejores habilidades para evadir la depredación de araña. Almacene las arañas a densidades de campo a un mesocosmos de cada par. Este será el tratamiento de estrés. Mesocosmos sin arañas será el tratamiento libre de estrés. Permita que las ninfas de saltamontes para desarrollar a finales de (4 º y 5 º) etapas estadio. Recoge todas las personas de las jaulas y RAndomly asignar a los individuos de cada jaula a uno de tres grupos de ensayo siguientes: (1) la validación de estado de estrés fisiológico, (2) la validación del cambio de cuerpo estequiometría elemental, (3) la descomposición microbiana. 2. Validación Saltamontes estado de estrés Medir la tasa metabólica estándar saltamontes (SMR), como la tasa de emisión de dióxido de carbono ( ) En un flujo a través incurrentes sistema de respirometría con un caudal de aire de 200 ml / min. Retirar el vapor de agua haciendo pasar el aire que fluye a través de un agente de secado. A raíz de la privación de alimentos de 16 horas (el agua debe estar disponible), pese saltamontes individuales (± 0,1 mg), y colocarlos en transparente 50 ml (9,2 cm de largo x 2,0 cm D) cámaras respirómetro y les permite recuperarse de manejar por lo menos 10 min antes de inicio de las mediciones. Bajo constante temperatura ambiente promedio temperatura (temperatura de ± 1% de variación del error estándar) dentro de la cámara respirómetro, analizar aire respirado con una infra-rojo analizador de CO 2 (por ejemplo Qubit S151-1 resolución ppm). Mida la media mínima en estado estacionario durante 10 min. El analizador ofrece CO 2 fraccionado concentración (partes por millón), pero SMR debe ser reportado como una tasa, por lo que hay que transformar las grabaciones FR = i ( – ) / {1 – [1 – (1/RQ)]}, dondeiles/ftp_upload/50061/50061eq3.jpg "fo: src =" / files/ftp_upload/50061/50061eq3highres.jpg "/> = concentración incurrentes fraccional de CO 2; = Concentración excurrent fraccional de CO 2; FR = caudal (ml min -1); RQ = cociente respiratorio, que se supone igual a 0,85 en los animales herbívoros. 3. Shift validación en Estequiometría Cuerpo Elemental Evaluar carbono: nitrógeno (C: N) contenido de una muestra de saltamontes recogidos de los mesocosmos de campo. Reducir la variación en C: N debido al consumo reciente de alimentos mediante la eliminación de los contenidos intestinales saltamontes bajo un microscopio de disección. Liofilizar el intestino vacío y el cuerpo durante 48 horas y luego moler la canal individual y tripa a un polvo homogéneo. Medida C: contenido de N del polvo usando un autoanalizador CNH. 4.La descomposición microbiana Place replicado pares de collares de PVC (15,4 cm de diámetro., Insertado ~ 4 cm en el suelo) en el sitio de campo (Figura 3C). Quite toda la vegetación en su interior a través de la saturación en la superficie del suelo. Estos collares se usan para las medidas de descomposición. Además, establecer un conjunto de collares de PVC en todo el sitio del campo para que actúe como 13 C natural abundancia controles (ver más abajo), a la que ni los grillos, ni hierba, hojarasca se agregan. Para un collar en cada par añadir 2 intactos, liofilizados cadáveres de saltamontes (registrar la biomasa original) criados con riesgo depredador como se ha descrito anteriormente, utilizando jaulas de campo. Al otro collar en cada par añadir 2 intactos liofilizados cadáveres criados sin riesgo depredador. Cubra los collares de PVC con una pantalla para evitar la extracción saltamontes por los carroñeros de las parcelas y dejar que los cadáveres se descomponen saltamontes durante 40 días. Mientras los cadáveres se descomponen, etiqueta hierba-litter con 13 C. Construir una cámara de plexiglás transparente (60 cm x 60 cm x 1,5 m) con una entrada y una válvula de salida (Figura 3B). Hunde un cuadrado de 60 cm x 60 cm marco de madera con un sello de goma cubierta con grasa de silicona 5 cm en el suelo (Figura 3B). Deslice la cámara en la parte superior de la estructura de madera de modo que la cámara se vuelve sellado por el caucho (Figura 3B). Conectar las entradas de cámara para cilindros de gas comprimidos que contienen 99% átomo de 13 CO 2. Las plantas dentro de la cámara serán etiquetados con 13 C, donde concentraciones de CO 2 se mantienen a los niveles ambientales (ya que las concentraciones elevadoras planta altera la partición de carbono). Los niveles ambientales son mantenidos por sólo pulsante marcado CO 2 durante cortos períodos de tiempo. Además, temperaturas de la cámara se controlan y cámaras se eliminan si las temperaturas alcanzan los 5 ° C unaBove ambiente. Una semana después del marcaje, comparar δ 13 C de la hierba de la camada con valores de abundancia naturales obtenidos de una muestra aleatoria de especies de gramíneas idénticas usando un Thermo DELTAplus relación isotópica espectrómetro de masa (Thermo, San Jose, CA, EE.UU.). Después de 40 días, añadir 10 g de secado al aire 13 C-etiquetados de hierba litera para cada collar que había sido modificado con carcasas saltamontes. Monitorear la tasa de mineralización de la hierba-basura in situ en 75 días por cada tapado cuello y el seguimiento tanto de la respiración total del suelo y la respiración de 13 CO 2. Esto se logra utilizando una técnica de flujo a través de la cámara, donde las muestras de gas de cada collar se controlan, en tiempo real, para cada cavidad 8 min utilizando espectroscopia ring-down (CRDS; Picarro Inc., Santa Clara, CA, EE.UU.; Modelo: G1101 -i). CRDS permite a uno seguir simultáneamente tanto el total como δ 13 Cde respiración del suelo. Estimar la contribución de 13 C-etiquetados de hierba basura a la respiración total del suelo usando las ecuaciones de isótopos de mezcla. La cantidad de hierba-basura derivada de CO 2 se calcula de la siguiente manera: (. Δ 13 C respiración – δ 13 C nat.abn) C hierba-basura derivada total × = C / (δ 13 C de hierba litera – δ 13 C nat . ABN), donde C total es la cantidad total de C respirado durante una medición dada, δ 13 C de respiración es el δ 13 C de respirado-C para cuellos modificados con litera hierba etiquetados, δ 13 C nat.abn. es la media δ 13 C de C respirado en los tres collares de abundancia natural (es decir, aquellos que no han sido modificados con litera), y δ 13 C hierba-basura es el δ 13 C de la camada hierba agregado a la coLlars. Controlar tanto la temperatura y humedad del suelo a través del experimento utilizando sondas de mano para corregir las diferencias en la respiración del suelo debido a las diferencias en la temperatura y la humedad. Aunque diseñado para uso en el campo, la cavidad ring-down instrumento de espectroscopia (Picarro Inc., Santa Clara, CA, EE.UU.; Modelo: G1101-i) las lecturas son sensibles al movimiento. Por lo tanto, es necesario erigir una estación de medida base central a todas las parcelas que contienen collares de PVC, y conectar el instrumento a los collares con longitudes de tubos de PVC.