Fare Östrus Döngüsü Evreleme Tanımlaması Vajinal Lavaj, Kristal Violet Boyama ve Vajinal Sitolojik Değerlendirilmesi Sahne
Summary
Burada, basit, non-invaziv toplama ve vaginal smear örneklerinin sitolojik değerlendirmesi ile fare üreme (Proestrus, kızgınlık, metestrus veya diestrus) aşamasında nasıl belirleneceği açıklanmaktadır. Biz daha vajinal sitoloji fare üreme döngüsü boyunca geçiş yatan hormonal seviyeleri dolaşımdaki nasıl yansıttığını açıklar.
Abstract
Kemirgenlerde üreme durumunu değerlendirmede hızlı bir araç değil sadece üreme disfonksiyon çalışmada yararlıdır ama aynı zamanda patolojik karşılaştırmadan sonra doku dejenerasyonu hormonal regülasyonu (veya rejenerasyon) içine yeni fare hastalık modelleri ve soruşturmaların üretimi için gereklidir. Proestrus, kızgınlık, metestrus ve diestrus: fare üreme (veya östrus) döngüsü 4 aşamadan ayrılmıştır. Over steroid 17-β-östradiol ve progesteron seviyelerini dolaşan Tanımlı dalgalanmalar, gonadotropinler luteinizan ve uyarıcı hormonlar folikül ve bu üreme aşamaları luteotropic prolaktin hormonu sinyal geçişi. Murin vajinal kanal içinde hücre tipolojisi değişiklikler bu temel endokrin olayları yansıtmaktadır. Çekirdekli epitel hücreleri, boynuzsu yassı epitel hücreleri, ve vajinal smear içinde mevcut lökositlerin göreli oran günlük değerlendirme mürin estrojen belirlemek için kullanılabiliraşamaları. Invazivlik derecesi, ancak bu örneklerin üreme durumunu değiştirmez ve smear sitolojik değerlendirilmesi bulandırabilir inflamatuar bir yanıt ortaya çıkarmak olabilir toplayarak istihdam. Burada, biz onu üreme döngüsü değiştirmeden bir kadın fare östrus siklusunun evresini belirlemek için kullanılabilecek basit, non-invaziv protokol açıklar. Biz nasıl dört vajinal smear baskın hücre tipolojisinin toplanması ve analizi ile östrus siklusunun evreleri ve bu değişikliklerin endokrin durumuna göre yorumlanabilir göstermek ayırt ayrıntı.
Protocol
Discussion
Hücre tipoloji Bu değişiklikler altta yatan endokrin olaylar göstergesidir. Estrojen döngüsü Proestrus faz adet döngüsünün 5 insan foliküler faz karşılık gelir ve 17-β-estradiol düzeyleri 6 dolaşan bir ön-ovulatuar artışın, aynı zamanda prolaktin 7 küçük dalgalanma (Şekil 2 ile tanımlanır, Proestrus, sol panel). 17-β-estradiol artış dolaylı uyarır gonadotropin salgılatıcı sırayla, sirkülasyon 8,9 içine luteinizan hormon ve follikül uyarıcı hormon serbest bırakmak için ön hipofiz içinde duyarlı hücreleri aktive, hipotalamus ve septumda hormon nöronlar (Şekil 2 , Proestrus, sol panel). Proestrus yılında hayvanlardan alınan vajinal smear, hücreler neredeyse sadece oval nükleuslu epitel hücreleri (Şekil 1D, Şekil 2, Proestrus, sağ panel) vardır. Folikül uyarıcı Horm yılında zirvekızışma 10,11 içine bir düzeyde sinyalleri yumurtlama ve giriş. Kızgınlık sırasında, 17-β-östradiol düzeyleri düşüş ve prolaktin seviyeleri zirve 6,7 (Şekil 2, Östrus, sol panel). Vajinal smear kümeleri genellikle düzensiz şekilli Boynuzsu skuamöz epitel hücreleri (Şekil 1E, Şekil 2, Östrus, sağ panel) neredeyse özel algılama ile karakterizedir. Metestrus girmesi progesteron hormon düzeyleri 6 sürekli bir artış ile çakışmaktadır ve insan luteal faz 12 (Şekil 2, Metestrus, sol panel) başlangıcına karşılık gelir. Progesteron seviyeleri yükselmeye başlar ve korpus luteum aktivasyon 6,13,14 (Şekil 2, Metestrus, sol panel) yanıt olarak 17-β-estradiol düzeyleri küçük bir dalgalanma var gibi. Bu aşamada sırasında vajinal smear mevcut hücre tipleri parçalanmış, boynuzsu epitel hücreleri ve küçük koyu lekeli lökosit (Figür vardırE 1F, Şekil 2, Metestrus, sağ panel). Son olarak, farelerde diestrus içine giriş oluşur ve progesteron seviyeleri insan geç luteal faz 12 karşılık gelen tepe 6, dolaşan. Corpus luteum Regresyon progesteron seviyeleri 15,16 bir sonraki keskin bir düşüş (Şekil 2, Diestrus, sol panel) yol açar. Lökositler diestrus sırasında smear baskındır. Boynuzsu epitel hücrelerinin sıklığı azalır ve çekirdekleşirken epitel hücrelerinin hemen önce Proestrus (Şekil 1G, Şekil 2, Diestrus, sağ panel) geçiş algılanabilir başlarız.
Özetle, bu basit, rutin protokolü günlük hormonal dalgalanmalar tahmin ve aşağıdaki önlemler alındığı takdirde üreme durumunu değiştirmeden deneysel farelerde östrus sahne kurmak için kullanılabilir. Örnekleme günde bir kez invazif olmayan bir protokol kullanılarak azalan fazla yapılmalıdırvajinal kanal, aspirasyon ve ajitasyon tekrarlanan penetrasyonu ile karşılaştırıldığında burada belirlemiş. Bu sitolojik değerlendirme yanıltabilecek smear mevcut olduğu lökosit ve diğer hücre tipleri ile sonuçlanan bir inflamatuvar yanıt 17 sonuçlanan vajinal tahrişe neden olabilir. Dahası, koloni yer kadınlarda, iyi anestrous 18 indüksiyonu ve bu tanımlama üreme, cinsiyet hormonal etkisi yorumlanması yararlıdır, ve hastalık çalışmaları gibi farklı farelerde uzun diestrus ve kızışma aşamaları görmek normaldir. Döngüsü uzunluğu değişkenlik de yaş ile birlikte kadın ve 7,19-21 kolonileri içinde konut farklılıkları (bireysel ya da grup-konut) tarafından tanıtıldı. Sadece kadınların koloniler içinde yer Dişiler bisiklet durdurma ve bisiklet bisiklet 24,25 ortaya çıkarmak için erkek idrar ile önceden kafesleri maruz tarafından yeniden aktarabileceği rağmen uzamış diestrus 18,22,23 bir devlet girebilirsiniz. Böylece, individua kurmakBelirli bir fare için l döngü uzunlukları, iki tam devir gözlenir kadar burada açıklanan non-invaziv değerlendirmeler, bakım, günlük yapılması tavsiye edilir.
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Biz görsel modeli yardım için video üretimi ve kurgusu ve Carleton Dr Martin Bertrand Immersive Media Studio / Sinir Rejenerasyon Laboratuvar uzman teknik yardım için Carleton Immersive Media Studio Marc Leonard teşekkür etmek istiyorum. Yazarlar minnetle Dr Marilyn Keaney ve Ottawa Hayvan Bakım ve Veteriner Hizmetleri Üniversitesi'nde adanmış tüm personelin uzman tavsiyesi kabul. Bu çalışma SALB, Yaşlanma CIHR Enstitüsü ve SALB ve SF, Kanada Vakfı Nörodejeneratif Lipidomics Sağlık Araştırma / CIHR Eğitim Programı (TGF 96121) Stratejik Eğitim Girişimi, Sağlık Araştırma Kanada Enstitüsü (CIHR, MOP 62826) tarafından finanse edilmiştir SF, SF Ontario Yenilik Güven ve SF Autodesk Araştırma Yenilik. ACM CIHR Banting ve iyi doktora ödülü aldı. NV Yaşlanma ve Nörodejeneratif Lipidomics yılında CIHR Eğitim Programı Enstitüsü sonrası profesyonel bursu alır.
Materials
| Name | Company | Catalogue # |
| Sterile 200 μl pipette tips | Diamed | E340901 |
| Latex bulb (1 ml) | Fisher | 03-488-21 |
| Glass microscope slides | Fisher | 12-550-15 |
| Crystal Violet stain (25 g) | Fisher | C581-25 |
| Light-duty Tissue Wipers | VWR | 82003-820 |
| Glycerol | Fisher | BP229-1 |
| Microscope Cover Glass (22×30) | Fisher | 12-544A |
References
- Adler, N. T., Zoloth, S. R. Copulatory behavior can inhibit pregnancy in female rats. Science. 168, 1480-1482 (1970).
- Adler, N. T., Resko, J. A., Goy, R. W. The effect of copulatory behavior on hormonal change in the female rat prior to implantation. Physiology. 5, 1003-1007 (1970).
- Yang, J. J., Larsen, C. M., Grattan, D. R., Erskine, M. S. Mating-induced neuroendocrine responses during pseudopregnancy in the female mouse. Journal of. 21, 30-39 (2009).
- Hong, H. Changes in the mouse estrus cycle in response to BRCA1 inactivation suggest a potential link between risk factors for familial and sporadic ovarian cancer. Cancer research. 70, 221-228 (2010).
- Hawkins, S. M., Matzuk, M. M. The menstrual cycle: basic biology. Annals of the New York Academy of Sciences. 1135, 10-18 (2008).
- Walmer, D. K., Wrona, M. A., Hughes, C. L., Nelson, K. G. Lactoferrin expression in the mouse reproductive tract during the natural estrous cycle: correlation with circulating estradiol and progesterone. Endocrinology. 131, 1458-1466 (1992).
- Parkening, T. A., Collins, T. J., Smith, E. R. Plasma and pituitary concentrations of LH, FSH, and prolactin in aging C57BL/6 mice at various times of the estrous cycle. Neurobiology of aging. 3, 31-35 (1982).
- Sarkar, D. K., Chiappa, S. A., Fink, G., Sherwood, N. M. Gonadotropin-releasing hormone surge in pro-oestrous rats. Nature. 264, 461-463 (1976).
- Rajendren, G., Gibson, M. J. A confocal microscopic study of synaptic inputs to gonadotropin-releasing hormone cells in mouse brain: regional differences and enhancement by estrogen. Neuroendocrinology. 73, 84-90 (2001).
- Kumar, T. R., Wang, Y., Lu, N., Matzuk, M. M. Follicle stimulating hormone is required for ovarian follicle maturation but not male fertility. Nature. 15, 201-204 (1997).
- Montgomery, V., Loutradis, D., Tulchinsky, D., Kiessling, A. FSH-induced ovulation in intact and hypophysectomized mice. Journal of reproduction and fertility. 84, 1-6 (1988).
- Mihm, M., Gangooly, S., Muttukrishna, S. The normal menstrual cycle in women. Animal reproduction science. , 124-229 (2011).
- Appelgren, L. E. Histochemical demonstration of drug interference with progesterone synthesis. Journal of reproduction and. 19, 185-186 (1969).
- Sander, V. A., Facorro, G. B., Piehl, L., de Celis Rubin, E., Motta, A. B. Effect of DHEA and metformin on corpus luteum in mice. Reproduction. 138, 571-579 (2009).
- Stocco, C., Telleria, C., Gibori, G. The molecular control of corpus luteum formation, function, and regression. Endocrine reviews. 28, 117-149 (2007).
- Rudolph, M. Induction of overt menstruation in intact mice. PLoS One. 7, e32922 (2012).
- Yano, J., Lilly, E., Barousse, M., Fidel, P. L. Epithelial cell-derived S100 calcium-binding proteins as key mediators in the hallmark acute neutrophil response during Candida vaginitis. Infection and immunity. 78, 5126-5137 (2010).
- Whitten, W. K. Occurrence of anoestrus in mice caged in groups. The Journal of endocrinology. 18, 102-107 (1959).
- Lamond, D. R. Effect of stimulation derived from other animals of the same species on oestrous cycles in mice. The Journal of endocrinology. 18, 343-349 (1959).
- Nelson, J. F., Felicio, L. S., Randall, P. K., Sims, C. A longitudinal study of estrous cyclicity in aging C57BL/6J mice: I. Cycle frequency, length and vaginal cytology. Biology of reproduction. 27, 327-339 (1982).
- Felicio, L. S., Nelson, J. F., Finch, C. E. Longitudinal studies of estrous cyclicity in aging C57BL/6J mice: II. Cessation of cyclicity and the duration of persistent vaginal cornification. Biology of reproduction. 31, 446-453 (1984).
- Van Der Lee, S., Boot, L. M. Spontaneous pseudopregnancy in mice. II. Acta physiologica et pharmacologica Neerlandica. 5, 213-215 (1956).
- Van Der Lee, S., Boot, L. M. Spontaneous pseudopregnancy in mice. Acta physiologica et pharmacologica Neerlandica. 4, 442-444 (1955).
- Armaiz-Pena, G. N. Estrous cycle modulates ovarian carcinoma growth. Clinical cancer research : an official journal of the American Association for Cancer Research. 15, 2971-2978 (2009).
- Jemiolo, B., Harvey, S., Novotny, M. Promotion of the Whitten effect in female mice by synthetic analogs of male urinary constituents. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 83, 4576-4579 (1986).
