마우스 Estrous 사이클 스테이징 확인을 위해 질 세척, 크리스탈 바이올렛의 착색 및 질 Cytological 평가를 수행
Summary
여기, 우리는 간단한 비 침습적 수집 및 질을 뛰어 넘는 샘플 cytological 평가하여 손쥐 생식 (proestrus, 발정, metestrus, 또는 diestrus)의 단계를 확인하는 방법에 대해 설명합니다. 우리는 더 질 세포학은 손쥐 생식주기를 통해 전환을 하부 호르몬 수준을 순환 반영 방법에 대해 설명합니다.
Abstract
설치류에 생식 상태를 평가의 급속한 수단뿐만 아니라 생식 기능 장애의 연구에 유용합니다뿐만 아니라 병적 인 도전에 따라 조직 변성의 호르몬 조절 (또는 재생)에 새 마우스 질병의 모델과 조사의 생산이 필요합니다. proestrus, 발정, metestrus 및 diestrus : 손쥐 생식 (또는 estrous)주기는 4 단계로 나누어 져 있습니다. 난소 스테로이드 17-β-에스트라 디올과 progesterone의 수준을 순환에 정의 변동, gonadotropins는 luteinizing와 자극 호르몬을 고치,이 생식 단계를 통해 luteotropic 호르몬 prolactin 신호 전환. 손쥐 질 운하 내에서 세포 예표 론의 변화는 이러한 기본 내분비 이벤트를 반영합니다. nucleated 상피 세포, cornified 편평 상피 세포, 그리고 질 얼룩에 존재하는 백혈구의 상대 비율 매일 평가는 손쥐 estrous을 식별하는 데 사용할 수 있습니다단계. invasiveness의 정도 그러나, 이러한 샘플 생식 상태를 변경하고 얼룩의 cytological 평가를 먹이고 수있는 염증 반응을 유도 할 수 있습니다 수집에 채용. 여기, 우리는 그녀의 생식주기를 변경하지 않고 여성 마우스의 estrous주기의 단계를 결정하는 데 사용할 수있는 간단한 비 침습적 프로토콜을 설명합니다. 어떻게 우리가 네 가지 질 얼룩의 주된 세포 예표 론의 수집과 분석에 의한 estrous주기의 단계와 우리가 이러한 변경 사항은 내분비 상태에 대해 해석 할 수있는 방법을 보여 구별하는 방법을 자세히 설명합니다.
Protocol
Discussion
셀 예표 론의 이러한 변화는 기본 내분비 이벤트를 나타내는 수 있습니다. estrous주기의 proestrus 단계는 월경주기 (5)의 인간 follicular 단계에 해당하며 17 β-에스트라 디올 수치에게 6 순환의 사전 ovulatory 증가뿐만 아니라, prolactin 7의 작은 급증 (그림 2에 의해 정의되는 것은, Proestrus, 왼쪽 패널). 17 β-에스트라 디올의 증가는 간접적으로 자극 생식샘 자극 호르몬 – 방출 차례로, 순환 8,9에 luteinizing 호르몬과 소낭 자극 호르몬을 출시 할 앞 뇌하수체에 반응 세포를 활성화, 시상 하부 및 심실 중격 호르몬 뉴런을 (그림 2 , Proestrus, 왼쪽 패널). proestrus의 동물에서 가져온 질 얼룩에서 세포는 거의 대부분 타원형 nucleated 상피 세포 (그림 1D, 그림 2, Proestrus, 오른쪽 패널)입니다. 소낭 자극의 horm의 피크발정 10,11 하나의 레벨 신호의 배란 및 항목. 발정 기간 동안, 17-β-에스트라 디올 수치 감소와 prolactin 수준에게 최대 6,7 (그림 2, 발정, 왼쪽 패널을). 질 얼룩은 clumps에서 종종 불규칙 모양의 cornified 편평 상피 세포 (그림 1E, 그림 2, 발정, 오른쪽 패널)의 거의 독점적 인 검색을 특징으로하고 있습니다. metestrus에 입장 progesterone 호르몬 수준 6 연속 상승과 일치과 인간의 luteal 단계 12 (그림 2, Metestrus, 왼쪽 패널)의 시작 부분에 해당합니다. progesterone 수준은 상승이 시작 코퍼스 luteum 활성화 6,13,14 (그림 2, Metestrus, 왼쪽 패널)에 대한 응답으로 17 β-에스트라 디올 수치의 작은 동요가 있습니다. 이 단계 동안 질 얼룩에 존재하는 세포 유형은 조각, cornified 상피 세포와 작은 어두운 스테인드 백혈구 (Figur 아르전자 층, 그림 2, Metestrus, 오른쪽 패널). 마지막으로, 쥐 diestrus에 항목이 발생하고 progesterone 수준에게 인간의 말 luteal 단계 12에 해당하는 최대 6, 순환. 코퍼스 luteum의 회귀는 progesterone 수준 15,16의 후속 급락 (그림 2, Diestrus, 왼쪽 패널)로 연결됩니다. 백혈구는 diestrus 동안 얼룩에 predominate. cornified 상피 세포의 주파수는 감소 nucleated 상피 세포는 이전에 proestrus (그림 1G, 그림 2, Diestrus, 오른쪽 패널)으로 전환 할 감지하기 시작합니다.
요약하면,이 단순하고, 일상적인 프로토콜은 매일 호르몬 변동을 예측하고 다음주의 사항을 촬영하는 경우 생식 상태를 변경하지 않고 실험 쥐 estrous 단계를 설정하는 데 사용할 수 있습니다. 샘플링은 하루에 한 번씩 비 침습적 프로토콜 내림차순를 사용하는 것보다 더 이상 수행되지 않을 것입니다질 운하, 흡인 및 교반의 반복 침투에 비해 여기 ribed. 이 cytological 평가를 먹이고 있습니다 얼룩에 존재하는 백혈구와 다른 세포 유형의 결과 염증성 응답 17에 결과 질 자극을 일으킬 수 있습니다. 또한, 심지어 식민지-자리 여성은, 그게 잘 anestrous 18 유도하고이 식별 번식이, 성별에 호르몬 영향의 해석에 유용합니다, 질병 연구 등 다양한 마우스에 확장 diestrus와 발정 단계를 볼 정상입니다. 사이클 길이 변화는 나이가 및 여성 7,19-21의 식민지에서 주택의 차이 (개인 또는 그룹 주택)에 의해 소개되어 있습니다. 여성 전용 식민지에 자리 잡고 여자들은 자전거를 중단하고 자전거는 자전거 24,25을 유도하는 남성 소변과 pretreated 케이지에 노출에 의해 다시 instated 할 수 있지만 장시간 diestrus 18,22,23의 상태를 입력 할 수 있습니다. 따라서, individua를 확립하는주어진 마우스 리터 사이클 길이는,이 두개의 완벽한 사이클이 관찰 될 때까지 여기에 설명 된 비 침습적 평가가주의 매일 수행 할 것을 권장합니다.
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
우리는 시각적 모델 지원 비디오 제작 및 편집과 칼튼에서 박사 마틴 버트 란드 몰입 미디어 스튜디오 / 신경 재생 연구실에서 전문가 기술 지원 칼튼 몰입 미디어 스튜디오에서 마크 레너드 감사드립니다. 저자는 굉장히 박사 매릴린 Keaney와 오타와 동물 관리 및 수의학 서비스의 대학에서 그녀의 헌신적 인 직원의 모든 전문가의 조언을 인정합니다. 이 작품은 SALB, 노화의 CIHR 연구소 SALB와 SF, 캐나다 재단에 Neurodegenerative Lipidomics의 건강 연구 / CIHR 교육 프로그램 (TGF 96,121)의 전략적 교육 사업에 건강 연구의 캐나다 연구소 (CIHR, 걸레 62826)에 의해 재정 지원되었다 SF, SF에 온타리오 혁신 믿어, 그리고 SF에 대한 오토 데스크 연구에 혁신. ACM은 CIHR의 들소와 베스트 박사 상을 받게됩니다. NV는 노화와 Neurodegenerative Lipidomics의 CIHR 교육 프로그램의 연구소에서 포스트 – 전문 교제를받습니다.
Materials
| Name | Company | Catalogue # |
| Sterile 200 μl pipette tips | Diamed | E340901 |
| Latex bulb (1 ml) | Fisher | 03-488-21 |
| Glass microscope slides | Fisher | 12-550-15 |
| Crystal Violet stain (25 g) | Fisher | C581-25 |
| Light-duty Tissue Wipers | VWR | 82003-820 |
| Glycerol | Fisher | BP229-1 |
| Microscope Cover Glass (22×30) | Fisher | 12-544A |
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