Granulocitos dependiente de autoanticuerpos inducidos por ampollas en la piel
Summary
En el modelo animal descrito en el presente trabajo, se purificaron los anticuerpos IgG contra un tramo de 200 aminoácidos (aa 757-967) de colágeno VII se inyecta repetidamente a ratones que reproducen el fenotipo de formación de ampollas, así como características de la histo-e inmunopatológicos característicos a humanos epidermólisis bullosa adquirida (EBA)<sup> 1</sup>.
Abstract
Fenómenos autoinmunes se producen en individuos sanos, pero cuando la auto-tolerancia falla, la respuesta autoinmune puede dar lugar a una patología específica. Según Witebsky los postulados, uno de los criterios en el diagnóstico de una enfermedad autoinmune como es la reproducción de la enfermedad en animales de experimentación por la transferencia pasiva de anticuerpos. Para la epidermólisis bullosa adquirida (EBA), un prototipo de órganos específicos enfermedad autoinmune de la piel y membranas mucosas, varios modelos experimentales se establecieron recientemente. En el modelo animal descrito en el presente trabajo, se purificaron los anticuerpos IgG contra un tramo de 200 aminoácidos (aa 757-967) de colágeno VII se inyecta repetidamente a ratones que reproducen el fenotipo de formación de ampollas, así como funciones de la histo-e inmunopatológicos característicos a humanos EBA 1. El estallido de la enfermedad generalizada se ve generalmente 5-6 días después de la primera inyección y la extensión de la enfermedad se correlaciona con la dosis administrada de la collagen VII-IgG específica. El daño tisular (formación de ampollas) en la EBA experimental depende del reclutamiento y activación de granulocitos de tejido unidas a autoanticuerpos 2, -4. Por lo tanto, este modelo permite la disección de la vía inflamatoria dependiente de granulocitos implicados en el daño tisular autoinmune, como el modelo reproduce sólo las células T independiente de la fase eferente de la respuesta autoinmune. Además, su valor es subrayada por un número de estudios que demuestran el potencial de inducción de blister de autoanticuerpos in vivo e investigando el mecanismo de la formación de ampollas en EBA 1,3, -6. Por último, este modelo facilitará en gran medida el desarrollo de nuevas terapias antiinflamatorias en enfermedades inducidas por el autoanticuerpo. En general, el modelo de transferencia pasiva de los animales EBA es un modelo de la enfermedad accesible e instructivo y ayudará a los investigadores a analizar no sólo la patogenia EBA pero para responder fundamental biológica y clínicamentepreguntas esenciales autoinmunidad.
Protocol
Representative Results
Discussion
La transferencia pasiva de anticuerpos en animales de experimentación es un enfoque importante para demostrar su patogenicidad 7, -12. Los modelos animales obtenidos a través de este método, además de ser la evidencia indirecta de la autoinmunidad 13, permitir la investigación de la fase eferente de los mecanismos patogénicos. El modelo de transferencia pasiva de anticuerpos inducidos por granulocitos dependiente de la formación de ampollas en la piel epidermólisis bullosa adquirida (EBA) f…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Los autores reconocen el apoyo de subvenciones de la Deutsche Forschungsgemeinschaft SI-1281/4-1 y BIOSS de la Facultad de Medicina de la Universidad de Friburgo (para CS).
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| recombinant antigen | The plasmids encoding for the recombinant forms of murine collagen VII are available from the corresponding author. | ||
| immune rabbit serum | www.eurogentec.com | We had New Zealand White rabbits immunized with 200 μg of antigen, 3 times at 2 week intervals. For this purpose we have used the services of Eurogentec S.A., Belgium. | |
| Protein G agarose | Roche Applied Science | 11243233001 | |
| Balb/c mice | Charles River Laboratories | ||
| OCT compound, Tissue-Tek | Sakura Finetek | 4583 | OCT, optimal cutting temperature |
| Cryomold standard | Sakura Finetek | 4557 | 25 mm × 20 mm × 5 mm |
| Cryomold intermediate | Sakura Finetek | 4566 | 15 mm × 15 mm × 5 mm |
| Uni-Link-Einbettkassette | R. Langenbrinck | 09-0503 | Histology processing and embedding cassettes |
| Spezial-Tatowierfarbe Schwarz | H. Hauptnerund & Richard Herberholz GmbH & Co. KG | 71492000 | tattooing paste |
| Tatowierzange TZ1 | EBECO E. Becker & Co GmbH | tattooing device | |
| Heparin | Carl Roth GmbH & Co. | 7692.1 | |
| Formaldehyde 37% | Carl Roth GmbH & Co. | 7386 | |
| Ketamine hydrochloride | Sigma-Aldrich Chemie GmbH | K2753-1G | |
| Xylazine hydrochloride | Sigma-Aldrich Chemie GmbH | X1251-1G | |
| sterile PBS | Biochrom | L182-50 | |
| digital camera | Nikon | Coolpix 5400 | |
| Syringe driven filter unit 0.45 μm | Millipore | ||
| Caliper | Mitutoyo 7309 | 1667338 | Farnell (distributor) |
| disease scoring sheet | example enclosed |
References
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