Transplante hepático ortotópico experimental em ratos

1. Operação doador Anestesiar ratos machos, pesando 200 ± 20 gramas, com isoflurano em cone máscara (3% para a indução, 2% durante a operação, um fluxo de ar l / min, FiO2 70%). Realize uma laparotomia mediana e grande transversal e cauterização dos vasos epigástricos em ambos os lados. Cortar o ligamento falciforme, e separar a veia esquerdo do diafragma a partir da veia cava suprehepatic. Finalmente, dividir a veia do diafragma entre duas ligaduras de seda 7-0. Corte o triangular esquerdo e os ligamentos gastro-hepáticas. Divida o ligamento hepato-esofágico e artéria entre 7-0 ligaduras (coagulação é uma alternativa válida). Isolar o infrahepatic veia cava para baixo para a veia renal esquerda. Separa-se a veia renal direita a partir dos tecidos circundantes e dividi-lo entre um 10-0 e uma ligadura 7-0, nas suas extremidades proximal e distai, respectivamente. Divida a veia supra-renal direita entre 7-0 ligatures e livre o fígado de seus ligamentos posteriores cortando sob leve tração. Isolar a veia gastroesplênico e dividi-lo entre um 10-0 e uma ligadura 7-0, nas suas extremidades proximal e distai, respectivamente. Divida a artéria hepática própria entre 7-0 laços. Isolar a veia duodeno pâncreas e dividiu-a entre um 10-0 e uma ligadura 7-0, em sua extremidade proximal e distal, respectivamente. Insira um 22G, 3,5 mm de stent no ducto biliar comum através da prática de uma pequena incisão de 1 cm de distância a partir do hilo hepático. Fixe o stent em posição com uma ligadura 7-0. Injectar 10 UI de heparina, diluiu-se em 1 ml de solução salina normal, através da veia dorsal do pénis. Canular a porta cava (tanto quanto possível a partir do hilo) com uma agulha de 21G e suavemente lavar o fígado com 20 ml de lactato de Ringer frio (ou outras soluções de conservação). Ao mesmo tempo, cortar a veia cava inferior das veias renais para permitir uma adequada outflow. Perfusão de fígado frio deve durar entre um e dois minutos. Corte a porta abaixo da veia cava duodeno pâncreas. Corte o duto biliar comum distal à ligadura ao redor do stent. Complete a incisão da veia cava infrahepatic. Cortar o supra-hepática da veia cava desnatado para o diafragma e remover o fígado. Coloque o fígado em uma bacia cheia de ringer lactato fria e colocar a bacia em uma almofada de gelo. 2. Preparação do Enxerto Insira o porta veia em seu punho, então everter o navio ao redor da borda para expor a íntima. Fixe o segmento evertido no punho com uma ligadura de 7-0. Repita a mesma operação no infrahepatic veia cava. Posicionar uma braçadeira de micro-(4-6 mm de comprimento) na parte proximal do infrahepatic veia cava. Esta operação evita a perda de sangue após a reperfusão do portal. Derrubar o fígado e inserir duas prolene 8-0 suturasnas bordas opostas laterais da supra-hepática da veia cava, de fora para dentro. Guarde o enxerto (imersos em solução de ringer lactato) na geladeira a 0-4 ° C. 3. Operação destinatário Anestesiar ratos machos, pesando 200 ± 20 gramas, com isoflurano em cone máscara (3% para a indução, 2% durante a operação, um fluxo de ar l / min, FiO2 70%) e manter em uma almofada de aquecimento. De nota, pesos receptores e os doadores devem ser combinados (± 40 gramas). Injectar 10 ml de soro fisiológico por via subcutânea e 0,03 g de piperacilina / tazobactam intramuscular antes da laparotomia. Realize uma laparotomia xipho-púbica na linha média. Inverter o processo xifóide com uma pinça de auto-estáticas, a fim de melhor expor o fígado. Corte os ligamentos anterior e dividir a veia diafragmática esquerda entre dois laços 7-0. Divida o ligamento hepato-esofágico e artéria entre 7-0 ligaduras (coagulation é uma alternativa válida). Não é mostrado no vídeo (idêntica à operação de dador). Isolar o infrahepatic veia cava até a veia renal direita. Dividir a veia supra-renal direita entre 7-0 ligaduras e fígado o livre a partir dos seus ligamentos posteriores cortando sob uma ligeira tracção (não mostrado no vídeo (idêntica à operação de dador)). Coloque uma ligadura 7-0 ao redor do ducto biliar comum, logo abaixo de sua divisão. Dito de outra ligadura um milímetro abaixo e cortar no meio. Isolar a artéria hepática no hilo e dividi-lo entre 7-0 ligaduras. Gentilmente separar ramos portais direito e esquerdo. Preste atenção para não danificar a artéria hepática comum ou a veia gastro-esplênica. Posicione o anel ao redor da cava da veia cava, cranialmente até a veia renal direita. Em seguida, fixar a parede do vaso para o anel através da colocação de quatro cardinais 9-0 suturas. Repita a mesma operação com o anel de portal na porta cava. </li> Injectar 10 UI de heparina, diluiu-se em 1 ml de solução salina normal, através da veia dorsal do pénis. Definir a anestesia em 0,25% ea FiO2 em 100%. Prenda o infrahepatic veia cava logo acima da veia renal direita, em seguida, apertar a veia porta logo acima da veia gastro-esplênica. Finalmente prender o supra-hepática da veia cava não se esquecendo de incluir pelo menos 2 mm do diafragma. Corte o supra-hepática da veia cava próxima ao parênquima. Corte a esquerda e os ramos direito do portal e dividir o septo entre os dois. Corte o infrahepatic veia cava próximo ao parênquima, prestando atenção para não incisar qualquer dos pontos previamente posicionados. Remover o fígado e colocar o enxerto para dentro da cavidade abdominal. Realizar uma anastomose ponta a ponta entre a cava supra-hepática veia do enxerto e do receptor. Comece com a sutura da parede posterior da esquerda para a direita, em seguida, proceder na parede anterior da direita para a leManter o pé de sutura anterior solto até ao fim, a fim de permitir que um rubor generosa do lúmen interior antes de apertar as extremidades. Insira o ramo caudal da aproximador no punho anel portal, em seguida, insira o porta cava do enxerto na fenda do ramo cranial da aproximador, com a braçadeira portal encontrar sua posição no slot. Feche o aproximador durante a lavagem do destinatário veia porta com solução salina normal e permitir que a braçadeira para inserir dentro do vaso. Fixe o destinatário da veia porta em torno de seu punho com um empate 7-0 circunferencial. Remover o aproximador. Abra o grampo na veia cava supra-hepática ea veia porta em ordem: fluxo portal está restabelecida. Retire o anel portal cortando as ligaduras 9-0 com extra-finas tesoura. Inserir o ramo caudal do aproximador no punho anel cava; então inserir o infrahepatic veia cava do enxerto na fenda do crânio ramo da aproximador, com a braçadeira cava encontrar sua posição no slot. Feche o aproximador durante a lavagem do destinatário infrahepatic veia cava com solução salina normal e permitir que a braçadeira para inserir dentro do vaso. Fixe o destinatário da veia cava em torno de seu punho com um empate 7-0 circunferencial. Remover o aproximador. Abra as microclamps no infrahepatic veia cava do enxerto e do receptor em ordem: fluxo venoso está agora restabelecida. Realizar uma incisão parcial do ducto do destinatário biliar comum, aplique uma leve tração para a cabeça, e insira o lado livre do stent previamente inserido no ducto biliar do enxerto. Fixe o stent com um empate 7-0 circunferencial. Feche o animal por camadas com 5-0. Permitir que a água livre e comida de despertar. Administrar analgesia eficaz de acordo com protocolos institucionais locais. Uma duração mínima de 24 h é recomendada. > _content "Digno de nota: fim-de-final da anastomose da artéria hepática pode ser realizada, quando exigido pelo projeto experimental (a artéria não é necessário para a sobrevivência a longo prazo após o transplante de fígado de rato). 4. Os resultados representativos A técnica descrita pode ser dominado com sucesso pela nossa equipe após cerca de 10 cirurgias de treinamento. Ele permitiu que 100% sobrevivência a longo prazo (> 21 dias) em 36 consecutivo Lewis-a-Lewis e Agouti-a-Lewis Trevas transplantes, após o período de formação de curta duração (um número de receptores de enxertos singênicos fígado foram mantidos vivos por mais de 12 meses agora). Pós-transplante singénicos dia 1 testes de função hepática mostrou aspartato transaminase mediana (AST): 84 U / l (51,7-92,7) alanina transaminase e mediana (ALT): 172,5 U / l (127,5-240,2). A fase anepática média (de veia porta de fixação de enxerto re-perfusão) foi de 14 ± 2 min, com o maior passo de ser o supra-hepática da veia cava anastomose (executando suture) tempo de 9 ± 2 min. O sistema quick-linker permitiu o posicionamento de 1,55 mm de calibre algemas em veia porta e 2,40 mm de calibre punhos na veia cava (destinatários pesando 200 ± 20 g). Em contraste, quando tentámos transplante utilizando a técnica de Kamada, eles não podia exceder 1,40 milímetros e 2,16 milímetros, respectivamente (ratos correspondentes para a estirpe e peso). Como mostrado na Figura 7, rápido-linker anéis são concebidos para manter os vasos receptoras sobre óptima alongamento, permitindo paquímetro mínimo e desperdício de comprimento, o que resulta em mais perto-a-fisiológicas resultados hemodinâmicos. Figura 1. Medidas anéis. Figura 2. Medidas Microclamps. <br /> Figura 3. Quick-linker kit. Figura 4. Quick-linker armado. Figura 5. Quick-linker fechado. Figura 6. Braçadeira SHVC. Figura 7. Clássico contra quick-linker assistidas manguito anastomose-hemodinâmica. Figura 8. Doadores e preparação destinatário pele e incisão.