マダニScapularisダニの唾液、唾液腺、および体液コレクション
1Microbiology and Pathogenesis Activity, Bacterial Diseases Branch, Division of Vector-Borne Diseases, National Center for Emerging and Zoonotic Infectious Diseases,Centers for Disease Control and Prevention, 2Tick-Borne Diseases Activity, Bacterial Diseases Branch, Division of Vector-Borne Diseases, National Center for Emerging and Zoonotic Infectious Diseases,Centers for Disease Control and Prevention
Summary
ダニ媒介性病原体が病気を引き起こす方法感染したダニの体液のコレクション、唾液腺、唾液は勉強することが重要です。このプロトコルでは、餌から体液と唾液腺を収集する方法を示しています<em>イクソデス·スカプラリス</em>ニンフ。また、女性から唾液採取を実証<em> I. scapularis</em>大人。
Abstract
ダニは世界中に存在し、多くのダニ媒介性疾患を持つ人間を苦しめるされています。ダニはライム病とダニ媒介性回帰熱（ ボレリア属）、ロッキー山紅斑熱（ ロッキー山紅斑熱リケッチア ）、エーリキア症（ エールリヒアchaffeensisとE.エクイ ）、アナプラズマ病（ アナプラズマphagocytophilum）、脳炎（ダニの原因となる病原体のベクトルです。媒介性脳炎ウイルス）、バベシア症（ バベシア属）、コロラドダニ熱（Coltivirus）と、野兎病（ 野兎病菌 ）1-8。適切にホストに送信するこれらの感染性病原体は、差動、遺伝子発現を調節する目盛りのタンパク質と相互作用し、ダニ3,9-13を通して移行します。たとえば、ライム病剤、 ボレリアburgdorferiはは 、ダニの風土病サイクル14,15の祝宴と飢饉段階に差動遺伝子発現を介して適応します。また、 マダニティックとしては、消費吸血ボレリアは、唾液腺に移動すると追放された唾液9,16-19を使用してホストに送信され血体腔、腸内から複製と移行します。
ダニが供給されたホストは、通常、強力な止血及び先天性免疫応答11,13,20-22で応答します。これらのホストの応答にもかかわらず、I.ダニの唾液が3,11,20,21,23を供給するダニを支援するために免疫であるタンパク質、溶解剤、抗凝固剤、及びfibrinolysinsが含まれているため、scapularisは数日間供給できます。ダニの唾液や唾液腺抽出物（SGE）が保有する免疫調節活性は、多数のダニ媒介性病原体3,20,24-27の送信、増殖、普及を促進します。それは積極的に摂食ダニを分析し、ダニの唾液を収集することが不可欠である、さらにダニ媒介性感染症の病気を引き起こす方法を理解する。このビデオプロトコルは、解剖の技術を示しています体液の収集と積極的にIを供給から唾液腺の除去48時間および72時間後にマウスを配置した後scapularisニンフ。また、成人女性Iから唾液採取を実証scapularisダニ。
Protocol
1。スライドの準備のために体液のコレクション （動画1） 穏やかに表面殺菌に10分間、5分間、その後70％エタノールで3％、局所過酸化水素の動物や場所からダニを供給積極的に削除します。 PAPペンでシランコーティングされた顕微鏡スライド上に円を描くとPAPペンサークル内での目盛りを配置します。 シランコートしたスライドは、顕微鏡スライ?…
Discussion
ダニの体液、唾液腺、唾液のコレクションはダニ媒介性病原体の伝播の研究に重要であり、有病率、普及、増殖、目盛り、およびホスト6,11-13,20,23,29両方の持続性。目盛り30,31を分析する方法はいくつかあります。しかし、唾液腺を収集するときに唾液腺が破裂したり、ダニの遺骨が失われないように適切に目盛りを細かくすることが重要です。唾液腺は、それらが腸の汚染を…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
著者らは、マウスやウサギの彼らの手入れや、保守のために特別にベクトルを媒介とする疾病の動物資源支店の部門、アンドレアソン、リサマスウーディー、ヴァーナ·オブライエン、ジョン·リデルに感謝します。また、この原稿に向かって彼らの貢献のためにエイミー·ウルマン、テレサ·ラッセル、バーバラJ.ジョンソンに感謝します。最後に、この原稿の撮影に関連付けられているすべての合法性を導くためのグラフィックイラストやジュディ·ラヴェルを製造するためのCDCのコミュニケーションのためのアソシエートディレクターのオフィスでアリッサ·エッカートを確認したいと思います。
Materials
| Reagent | Company | Catalogue Number |
| Hydrogen peroxide | Fisher | H312-500 |
| Ethanol | Acros | 61509-5000 |
| PBS | Boston Bioproducts | BM-2205 |
| Dumont Fine forceps (3C) | Fisher | NC9906085 |
| Silane treated microscope slides | Bioworld | 42763007-1 |
| Pap pen | Bioworld | 21750008-1 |
| Super frost plus microscope slides | Fisher | 12-550-18 |
| Pilocarpine | Sigma | P6503-5G |
| Protease inhibitor cocktail | Sigma | P2714 |
| #11 disposable scalpel | Feather | 2975#11 |
| Nontoxic modeling clay | Fisher | S17307 |
| Capillary tubes | Chase scientific Glass, inc | 40A502 |
References
- Quach, K. A., Boctor, F. N., Elston, D. M. What’s eating you? Hyalomma ticks. Cutis. 87, 165-167 (2011).
- Graham, J., Stockley, K., Goldman, R. D. Tick-borne illnesses: a CME update. Pediatr. Emerg. Care. 27, 141-147 (2011).
- Nuttall, P. A., Paesen, G. C., Lawrie, C. H., Wang, H. Vector-host interactions in disease transmission. J. Mol. Microbiol. Biotechnol. 2, 381-386 (2000).
- Estrada-Pena, A., Jongejan, F. Ticks feeding on humans: a review of records on human-biting Ixodoidea with special reference to pathogen transmission. Exp. Appl. Acarol. 23, 685-715 (1999).
- Nuttall, P. A. Pathogen-tick-host interactions: Borrelia burgdorferi and TBE virus. Zentralbl Bakteriol. 289, 492-505 (1999).
- Jones, L. D., Hodgson, E., Nuttall, P. A. Enhancement of virus transmission by tick salivary glands. J. Gen. Virol. 70, 1895-1898 (1989).
- Labuda, M., Nuttall, P. A. Tick-borne viruses. Parasitol. 129, 221-245 (2004).
- Socolovschi, C., Mediannikov, O., Raoult, D., Parola, P. Update on tick-borne bacterial diseases in Europe. Parasite. 16, 259-273 (2009).
- Zhang, L., et al. Molecular Interactions that Enable Movement of the Lyme Disease Agent from the Tick Gut into the Hemolymph. PLoS Pathog. 7, e1002079 (2011).
- Piesman, J., Schneider, B. S. Dynamic changes in Lyme disease spirochetes during transmission by nymphal ticks. Exp. Appl. Acarol. 28, 141-145 (2002).
- Brossard, M., Wikel, S. K. Tick immunobiology. Parasitol. , S161-S176 (2004).
- Machackova, M., Obornik, M., Kopecky, J. Effect of salivary gland extract from Ixodes ricinus ticks on the proliferation of Borrelia burgdorferi sensu stricto in vivo. Folia Parasitol. 53, 153-158 (2006).
- Nuttall, P. A., Labuda, M. Tick-host interactions: saliva-activated transmission. Parasitol. 129, 177-189 (2004).
- Anguita, J., Hedrick, M. N., Fikrig, E. Adaptation of Borrelia burgdorferi in the tick and the mammalian host. FEMS Microbiol. Rev. 27, 493-504 (2003).
- Hovius, J. W., van Dam, A. P., Fikrig, E. Tick-host-pathogen interactions in Lyme borreliosis. Trends Parasitol. 23, 434-438 (2007).
- Dunham-Ems, S. M., et al. Live imaging reveals a biphasic mode of dissemination of Borrelia burgdorferi within ticks. Journal Clin. Invest. 119, 3652-3665 (2009).
- Ribeiro, J. M., Mather, T. N., Piesman, J., Spielman, A. Dissemination and salivary delivery of Lyme disease spirochetes in vector ticks (Acari: Ixodidae). J. Med. Entomol. 24, 201-205 (1987).
- Piesman, J. Transmission of Lyme disease spirochetes (Borrelia burgdorferi. Exp. Appl. Acarol. 7, 71-80 (1989).
- De Silva, A. M., Fikrig, E. Growth and migration of Borrelia burgdorferi in Ixodes ticks during blood feeding. Am. J. Trop. Med. Hyg. 53, 397-404 (1995).
- Horka, H., Cerna-Kyckova, K., Skallova, A., Kopecky, J. Tick saliva affects both proliferation and distribution of Borrelia burgdorferi spirochetes in mouse organs and increases transmission of spirochetes to ticks. Int. J. Med. Microbiol. 299, 373-380 (2009).
- Brossard, M., Wikel, S. K. Immunology of interactions between ticks and hosts. Med. Vet. Entomol. 11, 270-276 (1997).
- Wikel, S. K. Tick modulation of host immunity: an important factor in pathogen transmission. Int. J. Parasitol. 29 (99), 851-859 (1999).
- Binnington, K. C., Kemp, D. H. Role of tick salivary glands in feeding and disease transmission. Adv. Parasitol. 18, 315-339 (1980).
- Guo, X., et al. Inhibition of neutrophil function by two tick salivary proteins. Infect. Immun. 77, 2320-2329 (2009).
- Montgomery, R. R., Lusitani, D., De Boisfleury Chevance, A., Malawista, S. E. Tick saliva reduces adherence and area of human neutrophils. Infect. Immun. 72, 2989-2994 (2004).
- Lima, C. M., et al. Differential infectivity of the Lyme disease spirochete Borrelia burgdorferi derived from Ixodes scapularis salivary glands and midgut. J. Med. Entomol. 42, 506-510 (2005).
- Severinova, J., et al. Co-inoculation of Borrelia afzelii with tick salivary gland extract influences distribution of immunocompetent cells in the skin and lymph nodes of mice. Folia Microbiol. 50, 457-463 (2005).
- Labuda, M., Jones, L. D., Williams, T., Nuttall, P. A. Enhancement of tick-borne encephalitis virus transmission by tick salivary gland extracts. Med. Vet. Entomol. 7, 193-196 (1993).
- Kariu, T., Coleman, A. S., Anderson, J. F., Pal, U. Methods for Rapid Transfer and Localization of Lyme Disease Pathogens Within the Tick Gut. J. Vis. Exp. (48), e2544 (2011).
- Edwards, K. T., Goddard, J., Varela-Stokes, A. S. Examination of the internal morphology of the Ixodid tick Amblyomma maculatum koch, (Acari:Ixodidae); a “How-to” pictorial dissection guide. Midsouth Entomologist. 2, 28-39 (2009).
- Ledin, K. E., et al. Borreliacidal activity of saliva of the tick Amblyomma americanum. Med. Vet. Entomol. 19, 90-95 (2005).
- Ribeiro, J. M., Zeidner, N. S., Ledin, K., Dolan, M. C., Mather, T. N. How much pilocarpine contaminates pilocarpine-induced tick saliva?. Med. Vet. Entomol. 18, 20-24 (2004).
- Barker, R. W., Burris, E., Sauer, J. R., Hair, J. A. Composition of tick oral secretions obtained by three different collection methods. J. Med. Entomol. 10, 198-201 (1973).
- Burgdorfer, W. Hemolymph test. A technique for detection of rickettsiae in ticks. Am. J. Trop. Med. Hyg. 19, 1010-1014 (1970).
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Cite This Article
Patton, T. G., Dietrich, G., Brandt, K., Dolan, M. C., Piesman, J., Gilmore Jr., R. D. Saliva, Salivary Gland, and Hemolymph Collection from Ixodes scapularis Ticks. J. Vis. Exp. (60), e3894, doi:10.3791/3894 (2012).