Surmonter Absence de réaction dans encéphalomyélite allergique expérimentale (EAE) souches de souris résistantes par transfert adoptif et une stimulation antigénique
Summary
Certaines souches de souris sont capables de résister à l'induction de l'encéphalomyélite allergique expérimentale (EAE) de myéline de base des protéines. Décrit ici est un protocole de vaccination simple qui renverse l'insensibilité et induit la maladie paralytique dans plusieurs types de souris EAE taches résistantes.
Abstract
Auto-immune expérimentale (EAE) est une maladie inflammatoire du système nerveux central (SNC) et a été utilisé comme modèle animal pour l'étude de la maladie démyélinisante humaine, la sclérose en plaques (MS). EAE est caractérisée par une infiltration pathologique de cellules mononucléaires dans le SNC et par la manifestation clinique de la maladie paralytique. Similaire à MS, EAE est également sous contrôle génétique en ce que certaines souches de souris sont sensibles à induction de la maladie tandis que d'autres sont résistantes. En règle générale, C57BL / 6 (H-2 b) les souris immunisées avec la protéine basique de la myéline (MBP) ne parviennent pas à développer des signes de paralysie. Cette absence de réaction n'est certainement pas due à des défauts de traitement de l'antigène ou la présentation des antigènes de la MBP, comme un protocole expérimental décrit ici a été utilisé pour induire l'EAE sévère souris C57BL / 6 ainsi que d'autres souches de souris résistantes réputés. En outre, des clones de lymphocytes T encéphalitogènes de C57BL / 6 et souris Balb / c réactives à la MBP avait été le succèsentièrement isolée et propagée.
Le protocole expérimental consiste à utiliser un système de transfert cellulaire adoptive dans laquelle MBP-apprêté (200 pg / souris) C57BL / 6 cellules du donneur de ganglions lymphatiques sont isolées et cultivées pendant cinq jours avec l'antigène d'élargir le pool de cellules T spécifiques de MBP-. À la fin de la période de culture, 50 millions de cellules viables sont transférés dans naïfs syngéniques bénéficiaires à travers la veine de la queue. Souris receveuses ainsi traités ne développent pas normalement EAE, réaffirmant ainsi leur statut résistant, et ils peuvent rester indéfiniment normale. Dix jours de transfert cellulaire post, les souris receveuses sont mis au défi avec adjuvant complet de Freund (CFA)-émulsionnée MBP dans quatre sites dans les flancs. EAE sévère commence à se développer chez ces souris de dix à quatorze jours après la provocation. Les résultats ont montré que l'induction de la maladie était spécifique antigénique comme un défi avec des antigènes non pertinents n'a pas induit de signes cliniques de la maladie. De manière significative, un titrage de la dose d'antigène utilisé pourcontester les souris receveuses ont montré qu'il pourrait être aussi bas que 5 ug / souris. En outre, une étude cinétique de la date de stimulation antigénique a montré que défi pour provoquer la maladie a été efficace dès le 5 défi jours après antigénique et aussi longtemps que plus de 445 jours antigénique défi poste. Ces données démontrent clairement le point à l'implication d'un "longue durée de vie" population de cellules T dans le maintien de non-réponse. L'implication des cellules T régulatrices (Treg) dans ce système n'est pas défini.
Protocol
Discussion
Les études de l'EAE chez la souris utilisent souvent les neuroantigènes, des protéines de myéline de base (MBP), protéine protéolipidique (PLP) ou la protéine de myéline oligodendrocyte (MOG). Des études antérieures surtout utilisé MBP. PLP stimule des réponses fortes et cohérentes à partir de souris SJL. Plus récemment, MOG est la neuroantigen couramment utilisé, car les souris B6 sont sensibles à l'induction de la maladie avec cet antigène. Beaucoup de souches de gènes de souris les cibles s…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Soutenu en partie par des subventions de la National Institutes of Health (R01 et N01 NS37253 NS055167) et la National Multiple Sclerosis Society (RG 3288-A6).
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| Guinea pig spinal cords | Rockland Immuno-chemicals, Inc. Gilbertsville, PA 19525 www.rockland-inc.com |
GP-T065 | frozen |
| Freund’s Adjuvant, complete H37Ra | Difco Laboratories Detroit, MI |
231131 | |
| Multifit interchange-able syringe | B-D www.bd.com/us |
512133 | |
| RPMI 1640 | Mediatech Inc. Manassas, VA www.cellgro.com |
10-040-CM | |
| OVA | Sigma-Aldrich www.sigmaaldrich.com |
A5503 | |
| Mice | Jackson Laboratory Bar Harbor, Maine |
B6 mice: 0000664 |
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