Methoden voor intraveneuze toediening Zelf in een muismodel

1. Stallen en Acclimatisatie Procedures Mannelijke en vrouwelijke CD-1 muizen zijn ondergebracht met hetzelfde geslacht nestgenoten, tot 5 dieren per kooi, in standaard kunststof kooien met beta-chip beddengoed en nestlet pads, met draadrooster deksels voor flessen water en voedsel tegemoet te komen. Standaard muis chow en water zijn ad libitum beschikbaar in de woning kooien gedurende het experiment. Muizen worden bijgehouden op een omgekeerde licht-donker schema (lampjes op 22:00 tot 10:00). Muizen mogen de IVSA testen kamers acclimatiseren een week voor de start van experimentele procedures. 2. Operante Training Alle gedrags-procedures, waaronder gezoete melk training en intraveneus druggebruik zelftoediening sessies worden uitgevoerd met behulp van operante kamers meet 15,9 x 14 x 12,7 cm, uitgerust met 2 ultra-gevoelige muis hendels, lepel kopjes, stimulus verlichting en microliter spuit pompen (Med Associates Inc, St. Albans, VT, USA). Chambers zijn aangesloten op een computer met behulp van Med Associates Smart CR-interface en Med-PC-software voor het schema van de wapening te programmeren en gegevens te verzamelen. Naïeve muizen zijn gewend aan de operante kamers en getraind om hefboom pers met een gezoete melk beloning (0,1 ml), die in dipper beker. Operante melk training wordt gegeven in 1-uur sessies gedurende 5-7 dagen. Voltooiing van een vaste verhouding (FR) schema op de actieve hendel resulteerde in de presentatie van de dipper beker en de verlichting van een stimulus licht. De gezoete melk oplossing bestond uit sucrose (10 mg / ml, ACS Reagent, Sigma-Aldrich Inc St-Louis MO, USA) toegevoegd volle melk (3,25% vet). Operante training met een gezoete melk oplossing of een vloeibaar voedingsmiddel bekrachtiger is een veel voorkomende techniek die wordt gebruikt om te vergemakkelijken operante reageren in muizen 1,2. 3. Voorbereiding van de apparatuur te worden gebruikt tijdens de operatie RequIRED apparatuur – 20, 23 en 26 gauge naalden, slijpmachine, 1 cc spuiten, Tygon tubing, soldeerbout, heparine, antibiotica en pijnstillende. Bereid een naald om het inbrengen van de katheter geleiden in de halsader van scheren in een 20 gauge naald. De schacht van de naald wordt geschoren beneden met behulp van een slijpmachine om een ​​kanaal binnen de naald om de katheter slang te begeleiden in de ader te vormen. De naald kanaal moeten zorgvuldig worden gecontroleerd op metalen deeltjes die kunnen zijn gedeponeerd. Eventuele obstructies om het kanaal moet worden geschraapt met behulp van fijne getipt tang. Aan twee 1-cc injectiespuiten te gebruiken voor het spoelen en controleren van de catheter. Bereid twee spuiten door middel van 12 cm stukken Tygon-buis en vastzetten aan een uiteinde 26 gauge naalden bevestigd aan 1 cc injectiespuiten en strekken van de andere uiteinden van de slangen over 23 gauge naalden. Een injector worden gevuld met 0,9% steriele zoutoplossing en de andere met een gehepariniseerde ticarcilline oplossing (33 mg ticarcillineen 0,3 mg heparine per 10 ml steriele zoutoplossing). Bereid katheter canule caps. Tygon-buis is gespannen over een 23 gauge naald en 1 cm gesneden uit de afschuining. Smelt het open uiteinde van de buis een dikke afdichting. De buis moet worden gesmolten zodat de gehele canule cap lang genoeg om over de katheter canule, met het afgedichte uiteinde dat strak over het uiteinde van de canule. Merk op dat als de dop te lang is, bestaat het risico dat het zal worden gebogen en vervolgens doorboord tijdens het proces van de schroef-on catheter omvat. Aldus zorgvuldige voorbereiding van de catheter caps wordt aanbevolen om een ​​goede fit aan de canule voorzien. Bereid vereiste oplossingen. Alle reagentia zijn aangeschaft bij Sigma-Aldrich Inc (St-Louis MO, USA). Gehepariniseerde ticarcilline oplossing catheter spoelen – Los 0,33 g ticarcilline (dinatriumzout) en 0,003 g heparine in 10 ml steriele zoutoplossing. 0,03 ml van de oplossing wordt gespoeld thrdoorgedreven de katheter dagelijks. De antibiotische oplossing wordt toegediend om bloedstolsels en infecties te voorkomen uit ontwikkelingslanden. Amikicin (antibioticum) voor subcutane injectie – een enkelvoudige subcutane injectie wordt na een operatie in een dosis van 10 mg / kg om postoperatieve infecties. Ketoprofen (analgeticum) voor subcutane injectie – een enkelvoudige subcutane injectie wordt na een operatie bij een dosis van 5 mg / kg aan een postoperatieve pijn te beheersen. 4. Catheter Implantatie chirurgie Vereiste apparatuur en reagentia: Isofluraan, steriele zoutoplossing, alcohol (70%), 1 en 3 cc spuiten gevuld met een steriele zoutoplossing, 1-cc aangepaste spuiten, antibiotica en pijnstillende oplossingen bereid in paragraaf 3 hierboven, muis katheters (CamCaths, Cambridgeshire, UK ), katheter deksels (crystal doppen van HRS Scientific, Montreal, Quebec), oog glijmiddel, 4 cm plastic balk naar de ader verheffen (ditkan worden geconstrueerd uit een plastic Q-tip), polysporin, steriele swabs en gaas gebogen en rechte forceps, slagader klemmen, fijne schaar. Gebruik aseptische standaardtechnieken de chirurgische bank, de chirurgische instrumenten en de katheters worden gesteriliseerd operatie. Goede sterilisatie technieken omvatten stoomautoclaaf voor de chirurgische instrumenten en katheters gekocht CamCaths. Glaskraal sterilisatie kan ook gebruikt worden op de uiteinden van de chirurgische instrumenten. Ethyleenoxide sterilisatie kan worden ingezet op meer delicate katheters of materialen die risico smelten. Een meer gedetailleerde beschrijving van knaagdier chirurgische aseptische technieken zijn te vinden in de bijgevoegde referenties 1,2. Opzet van de bank, is instrumenten en neuskegel voor handhaving van de anesthesie geïllustreerd in de foto. Muizen zijn verdoofd met isofluraan gas, en gehandhaafd onder verdoving met behulp van een beademingsbuis onder een opvangsysteem. Eye smeermiddel (Tears Naturale PM) wordt toegepast op beide ogen om ze niet uitdrogen tijdens de procedure. Een geschikte chirurgische marge op geschoren rug van het dier en de hals. Voordat er incisies worden gemaakt, zijn de chirurgische velden beperkt met steriele lakens. Om de katheter voor het inbrengen bereiden in het rechter atrium van het hart, wordt de overmaat katheterbuis afgesneden 1,2 cm van de lamp van de katheter. Dit is de optimale lengte die voor volwassenen CD-1 muizen, ongeveer 8 weken oud, 20-25 gram lichaamsgewicht. De lengte van katheterbuis enigszins aan te passen (proefondervindelijk), gebaseerd op de stam, grootte en leeftijd van de muizen. Voorafgaand aan inbrengen wordt de spuit met een steriele zoutoplossing (sectie 3.2) aan de katheter canule, en de katheter wordt gespoeld en gecontroleerd op lekken. Houdendeze spuit bevestigd aan de katheter gedurende de chirurgische procedure. Het zal worden gebruikt om de katheter te spoelen, en zuig bloed in stap 4.7. Na de sterilisatie met 70% alcohol, is een 2 cm lange midscapular incisie gemaakt uitgaande midden op de rug en eindigt net onder de nek om de basis van de catheter tegemoet. Bindweefsel dient te worden gedwongen elkaar met een tang om ruimte te maken voor de katheter basis onder de huid. Plaatsen van het dier op zijn rug een tweede ondiepe 1 – 2 cm diagonaal incisie wordt gemaakt van het rechter sleutelbeen gaat omhoog om de dieren kaak, nadat het gebied is gereinigd met 70% alcohol. De halsader wordt oppervlakkig te vinden onder de huid van de nek. Ter voorbereiding van het inbrengen van de catheter, wordt buis van de basis van de katheter getrokken door de incisie op de rug en bracht dichtbij de halsader door het passeren van de buis onder de huid net over de rechterschouder. Het einde van de katheterbuis isvervolgens gekoppeld aan een arterieklem en geplaatst aan de zijde van het dier te houden in plaats. De juiste halsader ligt door voorzichtig af te stappen oppervlakkige bind-en vetweefsel van de incisie in de nek van het dier. Bindweefsel rond de ader is gebroken met elkaar gebogen forceps en de ader wordt vervolgens verhoogd met een steriele plastic bar. Losse geopend hechtdraad knopen zijn gemaakt rond elk uiteinde van de ader en de katheter slang is voorzien van schroefdraad door de bovenste knoop en lus over de hechtdraad te rusten ongeklemde over de rechter schouder. Voorafgaand aan het inbrengen, natte zowel de 20 gauge inbrengnaald en ader met steriele zoutoplossing om wrijving te verminderen. De naald evenwijdig aan de ader en voorzichtig ingebracht nabij de bodem van de verhoogde ader (Opmerking: ongeveer 0,5 cm van de naald dient om in de ader). Met behulp van een tang, schuif de katheter buis in de schacht van de naald in de ader. Weerstand zou erop wijzen dat de slang is binnen bindweefsel en niet binnen de ader. Duw 0,03 cc van een zoutoplossing door de ader om ervoor te zorgen dat er geen lekken zijn. Lekken zou erop wijzen dat de ader kan worden doorboord of dat de katheter buis plaatsing moet worden aangepast. Opmerking: Om te controleren of de slang in de ader, proberen op te stellen wat bloed met behulp van de bijgevoegde zoutoplossingspuit. Als er bloed niet onmiddellijk kan worden vastgesteld, kan de ader of hartwand worden het afsluiten van de catheter tip, of de ader niet is doorboord; zet het slangetje en probeer het opnieuw. Naald reïntegratie kan nodig zijn als het bloed nog steeds niet kan worden opgesteld. Met het oog op de katheter op zijn plaats, druk op de katheter lamp om het invoegpunt en verwijder de naald. Bind de bodem knoop en vervolgens de katheter gelijk te trekken tegen de bar voordat u de koppeling van de tweede knoop recht boven de lamp. Test om te kijken of het bloed kan worden opgesteld en de knopen licht indien nodig los te maken. Stop de katheter buis onder de huid en hechtingde ventrale incisie rond de nek van het dier. Toepassing Polysporin Heal Fast met een steriel wattenstaafje applicator of andere antibiotische zalf die bij voorkeur een analgetische de gesloten incisie. Met het dier op de buik, plaatst de katheter base onder de huid van de rug in de bereide incisie. Zorg ervoor dat het teveel aan slangen minimaal een lus en goed verborgen onder de katheter uitvalsbasis om de kansen van het dier kauwen en piercing te minimaliseren. Hechten de insnijding aan beide zijden van de katheter base en pas Polysporin Heal Fast met een steriel wattenstaafje applicator. Spoel de katheter met 0,03 cc van de gehepariniseerde ticarcilline oplossing met behulp van de spuit met de slang is geplakt (paragraaf 3.2). Cap de canule met de plastic canule dop en schroef op de witte katheter deksel. In sommige muizen die vers van een operatie, kan het bloed lekken uit de katheter vóór de canule wordt afgedekt. Het is belangrijk om opnieuw te spoelen het dier en rapidly vervang de canule los voordat het bloed de kans te laten stromen. De dieren moeten worden gespoeld op een dagelijkse basis te katheter doorgankelijkheid te behouden. Na afwrijven van het injectiegebied tussen de dieren achterpoten met 70% ethanol, subcutaan injecteren de analgetische ketoprofen in een dosis van 5 mg / kg enerzijds en het antibioticum amikicin bij een dosis van 10 mg / kg aan de andere zijde. Na verdoving wordt stopgezet, worden dieren toegestaan ​​om in een schone kooi te herstellen met gemakkelijke toegang tot voedsel en water gedurende 5 tot 7 dagen. Muizen moeten worden geplaatst in een verwarmde kast 's nachts aan post-operatieve hypothermie te voorkomen. 5. Behavioural testen – Intraveneuze Self-administratie Voorafgaand aan gedrags-testen katheters worden gespoeld met 0,9% steriele zoutoplossing. Muizen worden daarna plaatsend in de operant kamers en met de infusie lijnen en infusiepompen. Active hefboompersen resulteren in een 3,2 sec 18 ul infusieperiode combinatie met de belichting van een stimulus licht. Elke hefboom pers wordt gevolgd door een 8 sec time-out periode waarin de stimulus blijft branden. Naar aanleiding van de operante sessie, worden muizen katheters gespoeld met de gehepariniseerde ticarcilline oplossing voordat ze terug naar hun kooi. Muizen mogen zelf toedienen gedurende 3 opeenvolgende 2-uur sessies bij elke dosis. Doses werden in willekeurige volgorde voor elke muis, zoals in het volgende hoofdstuk. Patency katheter wordt dagelijks vastgesteld door zowel de zoutoplossing en antibioticumoplossing kan worden gespoeld door de katheter. Bovendien kan een ketamine / midazolam proef uitgevoerd zoals beschreven in de bijgevoegde referentie 5. Kortom, tekenen van anesthesie zoals immobiliteit binnen 5 sec van een infuus van 0,02-0,03 ml ketamine (15 mg / ml),of midazolam (0,75 mg / ml) midazolam is het bewijs van een octrooi katheter 5.