通过横向流技术检测在血液系统恶性肿瘤患者侵袭性肺曲菌病

1。血清和支气管肺泡灌洗液的收集，存储和制备收集血液凝固允许在4°C和分装血清于-20°C间商店使用前未经处理的血液样本血清。支气管肺泡灌洗液（BAL），也应在-20°C储存为等分注：存储血清和BAL等分限制为靶抗原的降解样品反复冻融过程中重复检测的潜力。 解冻样品和血清和BAL样本彻底涡旋混合1分钟14,000转的离心机。 对于常规检测人血清样品，稀释血清与组织培养基（中医）1:1（V / V）。中医组成的RPMI-1640培养基，10％（V / V）胎牛血清，1％（V / V）为200mm L-谷氨酰胺的解决方案，和叠氮化钠作为防腐剂（0.02％W / V）。中期提前做好准备，可在4°C保存几个月。适用于100μL的dilut编辑血清对LFD的。 为人类灌洗液，从动物模型灌洗的液体，适用于100μL整齐的样品利丰，没有预先处理。 从动物模型的血清，稀释1:2（V / V）的血清磷酸盐缓冲液含4％（W / V）EDTA在沸水浴中，在14000转离心5分钟，3分钟热，适用于100微升利丰设备整齐上清。 2。血清和BAL的横向流动装置中的应用储存在室温（23℃）的横向流动装置。在此温度下，设备的稳定，为12个月。删除设备，从他们的邮袋和水平表面的地方。 使用无菌枪头，适用于100微升血清或利落的BAL样本前处理设备释放端口。 允许试验，运行15分钟，在室温下，当时的测试结果应记录。注：流体在几秒钟内将是SEEN迁移一直在观察窗的硝酸纤维素膜的毛细作用。 3。 LFD的结果记录和解读利丰组成的内部控制线（塑料外壳上的字母C表示）和测试线（由字母T表示）。控制线应始终出现，不论曲霉菌抗原在血清或BAL样本。这表明，该法已正常运行。 曲霉抗原的血清或BAL样本中，检测线也将出现在15分钟的示例应用程序。因为测试线的强度是曲霉抗原目前在样品量成正比，检测线可出现弱阳性（+），中度阳性（+ +）或作为一个强大阳性（+） 。然而，任何积极的测试线，无论强度，表明曲霉样品中的抗原存在。在日E的黑曲霉抗原的情况下，没有检测线就会出现，并把结果为阴性（ – ）记录。 4。代表结果代表性的例子是阴性，弱阳性，中度阳性，强阳性，BAL和血清样品LFD的结果如图1所示。 抗原阳性LFD的测试（强和弱）或急性髓细胞性白血病（AML）患者的诊断，根据EORTC /味精诊断标准灌洗流体的负面LFD的测试结果如表1所示。包括在本表中有相应的临床和真菌学（半乳甘露聚糖和文化）的数据，和曲霉菌特异性PCR在圣Bartholomews医院8开发的测试，为每一个病人的结果。对疾病的诊断是基于宿主因素（嗜中性白血球减少症，长期使用糖皮质激素治疗，与其他公认的T细胞immunosuppressants），临床标准和通用的灌洗阳性（这里定义为通用指标值> 0.8）。根据2002年EORTC /味精指引10 12，13和16，患者被诊断为“可能”的宿主因素和临床标准或通用的积极性的基础上的保险业监督。根据修订（2008）EORTC /味精的指导方针，宿主因素和转基因阳性单独或宿主因素和临床标准将不会显示“可能”侵入性真菌感染，除非陪同下，分别从临床数据和真菌的证据支持。 6患者被诊断为“可能”保险业监督在2002年和2008年的指引，因为主机的因素，主要和次要的临床特点和转基因阳性。注，而利丰也不PCR检测既不是目前在EORTC /味精指引，有两个实验和商业半乳甘露聚糖试验表明曲霉抗原和核酸中存在的BAL样本之间的强有力的协议 6例和12 S的。试验证明疗效的利丰和PCR检测诊断国际音标额外的结果，可以发现8约翰逊等人 。 图1负（仅控制线）和阳性（控制和测试线）利丰测试使用血清和BAL结果。测试线反应的强度是成正比的靶抗原在血清和BAL样本的浓度。反应通常从弱（+），通过适度的（+），以强（+）。无论测试线强度，所有三个血清阳性反应，表明侵袭性肺曲霉病，由于曲霉抗原在血液中循环的存在。灌洗反应阳性（弱，中度或强）表示可能在肺部的致病性菌丝萌发的孢子和发展。 pdflinebreak“> 病人没有。 帕蒂耳鼻喉科信息 1临床标准 灌洗文化2 通用汽车环境影响评估指数3 EORTC / MSG（2002）4 EORTC / MSG（2008）5 曲霉 PCR检测结果 LFD的结果 6 – 主要CT征象（结节和光环）和一个小负 0.9（正面） 可能可能积极弱阳性（+）， 12 假定以前的真菌感染没有大的，一个小 光滑念珠菌 6.43（强阳性） 可能没有积极强阳性（+ +） 13 凝固酶阴性葡萄球菌ylococcus和E。大肠杆菌在血液中没有大的，两个未成年的负 0.25（阴性） 可能没有负负（ – ） 16 肺部感染 3次要标准，包括新的渗透，加上复数积液负 0.16（阴性） 可能没有负负（ – ） 1结节或晕在电脑断层扫描，提示真菌感染 BALF中光滑念珠菌将被视为污染物，因为它是第二个最常见的酵母作为正常人体菌群的一部分分离 3指数> 0.8在通用环境影响评估测试灌洗是曲霉菌感染的指标 4基于2002年EORTC /味精诊断标准“possiblE'，'可能'或'证明'侵袭性真菌病10 5的基础上修订（2008）EORTC /味精诊断标准“可能”，“很可能”或“证明”侵袭性真菌病2 表1。BAL样本，可能近期行动计划“，并从控制AML患者（没有证据表明感染）急性髓细胞性白血病患者，LFD的测试和EORTC /味精感染的诊断结果。