このビデオプロトコルは、ニューロスフェアアッセイ培養法を用いて外科的に切除したヒト神経膠芽腫mutliforme(GBM)の腫瘍組織からの細胞のような分離と茎の拡大を示しています。
幹様細胞は、乳がん、肺がん、大腸、前立腺、脳などの腫瘍に分離されている。すべてのこれらの腫瘍の重要な問題は、特に神経膠芽腫のmutliforme(GBM)で、腫瘍形成、進行、および再発における役割を調べるために腫瘍開始細胞集団を同定し、分離することです。細胞集団を開始する腫瘍を理解することはこれらの腫瘍に対する効果的な治療法を見つけるための手がかりを提供します。そのシンプルさと再現性に起因するロスフェアアッセイ(NSA)は、この腫瘍細胞の多くの単離および増殖のための選択の方法として使用されています。このプロトコルは、外科的に切除したヒトGBMの腫瘍組織に幹細胞様細胞を分離して展開するニューロスフェア培養法を示しています。手順は、初期の化学的消化と腫瘍組織の機械的解離、およびその後NSAの文化の中で、その結果、単一の細胞懸濁液をめっきなどがあります。 7〜10日後に、150から2の一次ニューロスフェア直径00μmのが観察され、さらに継代と拡大のための準備が整いましたことができます。
神経幹細胞および正常成人と胎児の脳1、2、3、4から前駆細胞を単離するために、幹は、同じようにこのような肺5、前立腺6、乳房7、脳8、9のような癌組織由来の細胞ニューロスフェアのアッセイはまた、腫瘍されている頻繁に選択の方法として使用。 ex vivoでの多能、注入時に新しい腫瘍を作成する機能、および自己再生、このシンプルで再現性のアッセイを使用して、一つは体性幹細胞と同様の特性を示す切除した腫瘍組織からの細胞の無限数を生成することができます。これらの細胞は、細胞間相互作用、および分化、遊走、浸潤および細胞死を含む基本的な癌の細胞生物学を研究するために使用することができる。さらに、孤立した腫瘍幹様細胞はどのように腫瘍の形態、進行、および再発とも勉強し、最終的に治療するために洞察力を提供できる基盤となる派生する細胞メカニズムを解明する貴重なツールを提供オプション。
The authors have nothing to disclose.
脳腫瘍の治療のためのプレストンA.ウェルズジュニアセンター、この作品は、脳腫瘍研究のためのフロリダセンターからの補助金によって支えられている。
Name of the reagent | Type | Company | Catalogue number | Comments |
NeuroCult NSC Basal Medium (Human) | Medium | Stem Cell Technologies | 05750 | |
NeuroCult NSC Proliferation Supplements (Human) | Medium supplement | Stem Cell Technologies | 05753 | |
%0.05 trypsin-EDTA | Reagent | Gibco | 25300-062 | |
*MEM | Reagent | Gibco | 41500-018 | HEM component |
*HEPES | Reagent | Sigma | H4034 | HEM component |
*Distilled water | Reagent | Gibco | 15230-147 | |
**DNase I | Reagent | Roche | 104159 | |
**Soybean trypsin inhibitor | Reagent | Sigma | T6522 | |
Pen/Strep | Reagent | Gibco | 15140-122 | |
No. 10 scalpel blade | Surgical tool | BD | 371610 | |
Petri Dish | Culture ware | BD Falcon | 353003 | |
Small forceps | Surgical tools | Fine Science Tools | 11050-10 | |
Cell strainer | Sieve | BD Falcon | 352340 | |
T25 flask | Culture ware | Nalge Nunc international | 136196 | |
T80 flask | Culture ware | Nalge Nunc international | 178905 | |
15 ml tubes | Culture ware | BD Falcon | 352096 | |
50 ml tubes | Culture ware | BD Falcon | 352070 | |
EGF | Growth factor | R&D | 2028-EG | |
b-FGF | Growth factor | R&D | 3139-FB | |
Heparin | Growth factor | Sigma | H4784 | Reconstituted in PBS |
* To make HEM, mix 1x10L packet of MEM and160ml of 1M HEPES and bring the volume to 8.75 L using distilled water. Set the final PH to 7.4 and store it at 4°C.
** To prepare trypsin inhibitor solution, first make 10 ml of DNase I solution (100 mg DNase dissolved in 100 ml of HEM) and then add 0.14 g of trypsin inhibitor to DNase solution and finally make the volume up to 1 Liter using HEM. Keep aliquots of the final products in -20°C freezer.