توسيع الخلايا اللمفاوية T السامة للخلايا من دم الحبل السري أن الفيروس المضخم للخلايا الهدف، فيروس ابشتاين بار، واتش
Summary
نحن هنا وصف أول ممارسة التصنيع الجيد (GMP) المتوافقة مع طريقة لانتاج الفيروسات محددة الخلايا الليمفاوية T السامة للخلايا (CTL) من دم الحبل السري، ومصدرا للخلايا T السذاجة في الغالب.
Abstract
العدوى بالفيروس بعد زرع الخلايا الجذعية هي من بين الأسباب الأكثر شيوعا للوفاة، خاصة بعد دم الحبل السري (CB) زرع (CBT) حيث CB لا تحتوي على أرقام ملموس من الخلايا T فيروس ذوي الخبرة التي يمكن أن تحمي من الإصابة المتلقي 1 – 4 نحن وآخرون أظهرت أن الفيروس محددة CTL ولدت من المانحين مصليا وغرست إلى المستلم آمنة واقية. 5-8 ومع ذلك، وحتى وقت قريب، لم يكن الفيروس خلايا T محددة يتم إنشاء من دم الحبل السري، من المحتمل بسبب غياب خلايا محددة فيروس T الذاكرة.
في محاولة لتقليد بشكل أفضل في ظروف فتيلة الجسم الحي من خلايا T السذاجة، أنشأنا الطريقة التي تستخدم الخلايا الجذعية المشتقة من CB (DC) transduced مع ناقلات الغدانية (Ad5f35pp65) التي تحتوي على مستضد CMV سائد مناعيا pp65، والقيادة وبالتالي خصوصية T الخلية نحو CMV واتش. [9] في البدء، ونحن نستخدم هذه أماهtured البلدان النامية وكذلك CB-T في الخلايا المشتقة وجود السيتوكينات IL-7، IL-12، وIL 15-10 الساعة تحفيز الثانية التي تستخدم EBV-تحولت الخلايا B، أو EBV LCL، التي تعبر عن كل من كامنة والتحللي مستضدات EBV. وتستخدم Ad5f35pp65-transduced EBV-LCL لتحفيز خلايا T في حضور IL-15 في تحفيز الثانية. التحفيز لاحقة استخدام Ad5f35pp65-transduced EBV-LCL وIL-2.
من الخلايا وحيدات النوى 50×10 6 CB نحن قادرون على توليد ما يزيد عن 150 × 10 خلايا الفيروسات محددة 6 T ليز أن مستضد نابض الأهداف والسيتوكينات الإفراج ردا على التحفيز المستضدية 11 هذه الخلايا تم تصنيعها بطريقة GMP المتوافقة فقط باستخدام وقد ترجمت الكسر 20٪ من وحدة دم الحبل السري ومجزأة للاستخدام السريري.
Protocol
Discussion
يمكن الاستراتيجيات الحالية التي تهدف إلى السيطرة على العدوى الفيروسية بعد CBT تكون فعالة، ولكن ترتبط مع أنها السميات كبيرة، غالية الثمن، ولا تمنح حماية ضد العدوى على المدى الطويل في وقت لاحق. في الواقع، قد يكون استخدام بعض الأدوية المضادة للفيروسات يحد من التوسع ف…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
وأيد هذا العمل من قبل L. دان دنكان منحة بحثية تعاونية (CMB ونقابة الصحفيين المصرية)، المعهد الوطني للقلب والرئة، والدم المعهد (US4HL081007)، وسرطان الدم وسرطان الغدد الليمفاوية جمعية جائزة الباحث العلمي البحوث السريرية (CMB)، والمعهد الوطني للسرطان (RO1 CA06150816؛ نقابة الصحفيين المصرية).
Materials
| Name of reagent | Company | Catalogue number |
| RPMI 1640 | Invitrogen | 21870-076 |
| DC media | CellGenix | 20801-0500 |
| EHAA (Click’s Medium) | Irvine Scientific | 9195 |
| Human Serum | Gemini Bio Products | 100-110 |
| Gas Permeable Cultureware18 | Wilson-Wolf | 80040S |
| IL-2 | Chiron (TCH Pharmacy) | |
| IL-12 | NCI/CTEP | |
| IL-15 | CellGenix | 1013-050 |
| IL-7 | R&D | AFL207 |
| IL-1beta | R&D | AFL201 |
| IL-6 | CellGenix | 1004-050 |
| GM-CSF | TCH Pharmacy | |
| IL-4 | R&D | AFL204 |
| TNF-alpha | R&D | AFL210 |
| Ad5f35pp65 | BCM CAGT Vector Production Facility | |
| Plasma transfer set with female luer adapter | Charter Medical | 89-550-66j |
| Lymphoprep | Nycomed | 1114550 |
References
- Kennedy-Nasser, A. A. Comparable outcome of alternative donor and matched sibling donor hematopoietic stem cell transplant for children with acute lymphoblastic leukemia in first or second remission using alemtuzumab in a myeloablative conditioning regimen. Biol. Blood Marrow Transplant. 14, 1245-1245 (2008).
- Hanley, P. J. Improving clinical outcomes using adoptively transferred immune cells from umbilical cord blood. Cytotherapy. 12, 713 (2010).
- Szabolcs, P., Cairo, M. S. Unrelated umbilical cord blood transplantation and immune reconstitution. Semin. Hematol. 47, 22 (2010).
- Canto, E., Rodriguez-Sanchez, J. L., Vidal, S. Distinctive response of naive lymphocytes from cord blood to primary activation via TCR. J. Leukoc. Biol. 74, 998-998 (2003).
- Leen, A. M. Monoculture-derived T lymphocytes specific for multiple viruses expand and produce clinically relevant effects in immunocompromised individuals. Nat. Med. 12, 1160-1160 (2006).
- Riddell, S. R. Restoration of viral immunity in immunodeficient humans by the adoptive transfer of T cell clones. Science. 257, 238 (1992).
- O’Reilly, R. J. Adoptive transfer of antigen-specific T-cells of donor type for immunotherapy of viral infections following allogeneic hematopoietic cell transplants. Immunol. Res. 38, 237-237 (2007).
- Peggs, K. S. Adoptive cellular therapy for early cytomegalovirus infection after allogeneic stem-cell transplantation with virus-specific T-cell lines. Lancet. 362, 1375-1375 (2003).
- Sili, U. Large-scale expansion of dendritic cell-primed polyclonal human cytotoxic T-lymphocyte lines using lymphoblastoid cell lines for adoptive immunotherapy. J. Immunother. 26, 241 (2003).
- Bollard, C. M. Good manufacturing practice-grade cytotoxic T lymphocytes specific for latent membrane proteins (LMP)-1 and LMP2 for patients with Epstein-Barr virus-associated lymphoma. Cytotherapy. 13, 518 (2011).
- Hanley, P. J. Functionally active virus-specific T cells that target CMV, adenovirus, and EBV can be expanded from naive T-cell populations in cord blood and will target a range of viral epitopes. Blood. 114, 1958 (1958).
- Hanley, P. J. Expansion of T cells targeting multiple antigens of cytomegalovirus, Epstein-Barr virus and adenovirus to provide broad antiviral specificity after stem cell transplantation. Cytotherapy. , (2011).
- Gerdemann, U. Generation of Multivirus-specific T Cells to Prevent/treat Viral Infections after Allogeneic Hematopoietic Stem Cell Transplant. J. Vis. Exp. (51), e2736 (2011).
- Mori, T., Kato, J. Cytomegalovirus infection/disease after hematopoietic stem cell transplantation. Int. J. Hematol. 91, 588 (2010).
- Einsele, H. Infusion of cytomegalovirus (CMV)-specific T cells for the treatment of CMV infection not responding to antiviral chemotherapy. Blood. 99, 3916 (2002).
- Bao, L. Expansion of cytomegalovirus pp65 and IE-1 specific cytotoxic T lymphocytes for cytomegalovirus-specific immunotherapy following allogeneic stem cell transplantation. Biol. Blood Marrow Transplant. 14, 1156 (2008).
- Shpall, E. J., Bollard, C. M., Brunstein, C. Novel cord blood transplant therapies. Biol. Blood Marrow Transplant. 17, S39-S45 (2011).
- Vera, J. F. Accelerated production of antigen-specific T cells for preclinical and clinical applications using gas-permeable rapid expansion cultureware (G-Rex. J. Immunother. 33, 305 (2010).
