Görüntüleme için Basit Bir Yöntem Arabidopsis Infiltratif Görüntüleme Orta Perfluorodecalin kullanarak bırakır.
Summary
Biz perfluorodecalin infiltratif montaj aracı olarak kullanımı açıklanmaktadır. Bu görüntüleme derinliğini artırmak için basit bir yöntem.<em> Arabidopsis thaliana</em> Yaprak dokusu minimal fizyolojik etkiye sahip.
Abstract
Biyolojik örnekler derinliklerine yüksek çözünürlüklü görüntüler elde sorun yaygın olarak 1 kabul edilir . Süngerimsi mezofil hücreleri ve hava sahasındaki arasında ve biyolojik doku ve optik sistemin geri kalanı arasındaki hücresel bileşenleri arasındaki kırılma indisi çoklu geçişler, daha fazla zorluklar ortaya çıkan bitki yaprakları veya omurgalı akciğerler gibi hava dolu doku. Ayrıca, refraktif indeks uyumsuzlukları fluorofor uyarma ve floresan mikroskobu sinyal emisyon zayıflama neden olur. Biz perflorokarbon uygulama perfluorodecalin (PFD), optik, lazer güç zarar artar başvurmadan, derinlik konfokal mikroskobu (LSCM) örnek görüntüleme lazer tarama artırır ve fizyolojik etkilerini minimum 2 infiltratif bir görüntüleme aracı olarak burada açıklayın . Biz onun bir sonucu olarak optik karmaşık Arabidopsis thaliana yaprak dokusu ile PFD kullanımı için protokol tarifyapısı (Şekil 1). PFD 3 bu kullanım için uygun hale öznitelikleri bir numarası vardır. PFD kırılma indisi (1.313), su (1.333) ile karşılaştırılabilir ve sitoplazmada (yaklaşık 1.4) hava (1.000) daha yakındır. Buna ek olarak, PFD floresan olmayan, hazır ve toksik değildir. Sel sağlar stoma penetrasyon 4 – PFD düşük yüzey gerilimi (19 dynes cm-1), su (72 dynes cm-1) daha düşük ve aynı zamanda sınırı (30 dyne cm -1 25) altında potansiyel olarak yıkıcı bir vakum veya surfaktan uygulama olmadan süngerimsi mezofil hava sahasındaki. Son olarak ve en önemlisi, PFD, CO 2 ve O 2, böylece gaz değişimi örnek üzerinde fizyolojik etkileri en aza indirerek, sular altında doku muhafaza sağlar çözme için büyük bir kapasiteye sahiptir . Bu özellikler, kısmi sıvı solunum ve akciğer enflasyona içeren çeşitli uygulamalarda kullanılmaktadırTION 5,6 cerrahi, 7, 8 yapay kan, büyüme oksijenasyon medya 9, ve bitkiler buz 10 kristal oluşumu çalışmaları. Şu anda, canlı konfokal görüntüleme için su ya da sulu tampon doku monte etmek yaygındır. PFD montaj aracı olarak kullanımı, mevcut uygulamada bir iyileşmeyi temsil etmektedir ve görüntüleme için canlı bütün yaprak örnekleri basit bir hazırlık sağlar düşünün.
Protocol
Discussion
Bu hava ile doldurulmuş veya optik karmaşık dokuların mikroskopi artırmak için basit ve kullanımı kolay bir tekniktir. Biz tekniği, bazı güçlü avantajlara sahiptir ve biz bu hava zengin dokulara ait biyolojik soruları aydınlatmak için kullanılan olacağını umuyoruz göstermiştir. Örneğin, bitki mezofil ya da akciğerlerde patojen saldırı çalışmaları için doğal bir seçim olacaktır. Ayrıca tekniğin sınırlılıkları farkında. Biz daha iyi refraktif indeksi eşleşen üzerinde çalışıyoruz, uzun zaman ölçeğinde deneyler sırasında mikroskopi diğer modları ve perflorokarbon mountant ikmal kullanın. Ayrıca PFC en önemli avantajlarından biri, yani biyolojik olarak tesirsiz bir flipside olsa da, tanımak. PFC, ayrıca hormonlar, ilaçlar, ve diğer küçük moleküller veya iyonlar gibi ilgi bileşikleri kolayca sunmak için kullanılabilir olduğunu göstermektedir biyolojik moleküllerin kolayca çözülür.
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Yazarlar, onun tavsiye ve Exeter Üniversitesi bio-Tesis Exeter Üniversitesi'nden Prof. Nicholas Smirnoff teşekkür etmek istiyorum. Finansman İngiltere Biyoteknoloji ve Biyolojik Bilimler Araştırma Konseyi (hibe referans BB/E002682/1) tarafından sağlanmıştır.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| Perfluorodecalin | F2 Chemicals | N/A | Telephone to order. |
| Carolina Observation Gel | Blades Biological | 13-2700 |
References
- Inoue, S., Pawley, J. P. Foundations of Confocal Scanned Imaging in Light Microscopy. Handbook of Biological Confocal Microscopy, 3rd. , 1-16 (2006).
- Littlejohn, G. R., Gouveia, J. D., Edner, C. S. m. i. r. n. o. f. f., N, ., Love, J. Perfluorodecalin substantially improves confocal depth resolution in air-filled tissues. New. Phytologist. 186, 1018-1025 (2010).
- Sargent, J. W., Seffl, R. J. Properties of perfluorinated liquids. Fed. Fed. Proc. 29, 1699-1703 (1970).
- Schönherr, J., Bukovac, M. J. Penetration of stomata by liquids. Plant Physiol. 49, 813-819 (1972).
- Davies, M. W. Liquid ventilation. Paediatr. Child. Health. 35, 434-437 (1999).
- Shaffer, T. H., Wolfson, M. R., Greenspan, J. S., Hoffman, R. E., Davis, S. L., Clark, L. C. Liquid ventilation in premature lambs: uptake, biodistribution and elimination of perfluorodecalin liquid. Reprod. Fertil. Dev. 8, 409-416 (1996).
- Crafoord, S., Larsson, J., Hansson, L. J., Carlsson, J. O., Stenkula, S. The use of perfluorocarbon liquids in vitreoretinal surgery. Acta. Ophthalmol. Scand. 73, 442-445 (1995).
- Lowe, K. C. Engineering blood: synthetic substitutes from fluorinated compounds. Tissue Eng. 9, 389-399 (2003).
- Wardrop, J., Edwards, C. M., Lowe, K. C., Davey, M. R., Power, J. B. Cellular responses of plant protoplasts to culture with oxygenated perfluorocarbon. Adv. Exp. Med. Biol. 428, 501-505 (1997).
- Sukumaran, N. P., Quamme, H., Weiser, C. J. Use of fluorocarbons to study freezing in plant tissues. Plant Physiol. 50, 632-634 (1972).
- Nagai, T., Ibata, K., Park, E. S., Kubota, M., Mikoshiba, K., Miyawaki, A. A variant of yellow fluorescent protein with fast and efficient maturation for cell-biological applications. Nat. Biotechnol. 20, 87-90 (2002).
- Baker, N. R. Chlorophyll fluorescence: a probe of photosynthesis in vivo. Annu. Rev. Plant. Biol. 59, 89-113 (2008).
