Morris Teste Maze Água para déficits de aprendizagem e memória em camundongos Alzheimer Disease Modelo

1. Preparação Preparação de equipamento Obtenção de uma piscina circular com um diâmetro de 150 centímetros e uma profundidade de 50cm (Fig. 1). Se estiver usando ratos pretos, uma piscina de branco deve ser usado, se utilizando ratos brancos, uma piscina de preto deve ser usado. Organizar a sala de tal forma que o animal a ser testado não pode ver o experimentador durante o teste. Isso pode ser feito com cortinas ou divisórias. Coloque sinais de alto contraste espacial sobre o quarto, e / ou no interior da piscina em um local que seria acima da superfície da água. Coloque uma plataforma de 10 centímetros de diâmetro na piscina – branco para uma piscina branco, plexiglass claras para uma piscina de preto. Encher a piscina com água até a plataforma é um centímetro acima da superfície da água. Deixe a água atingir a temperatura ambiente (22 ° C). Dependendo da temperatura da água isso pode demorar 1-3 dias, ou, alternativamente, a água quente pode ser adicionada para acelerar o equilíbrio. Preparação de software Calibrar a piscina no software de computador para que a câmera pode criar informações distância física com base em pixel informações. Dividir a piscina em 4 quadrantes. Especificar a zona de plataforma como uma zona variável, que pode mudar com cada tentativa. Criar 5 subzones plataforma – um em cada quadrante, e um no centro da piscina. Salvar a calibração e usá-lo para os dias de teste restante. (Veja Fig. exemplo. 2). Definir o tempo de julgamento máximo de 60 seg. Se o mouse encontra a plataforma antes deste tempo, o programa de software para parar o teste quando a plataforma for encontrada. Especificar o programa para começar a acompanhar automaticamente, quando o pesquisador sai a área de testes. Utilizar qualquer "reflexão minimização" as suas opções de pacote de software fornece. Faixa de percurso, a latência de escape, eo tempo gasto em cada quadrante. 2. Dia 1: Plataforma Visible Programa de computador Carregar a calibração piscina no software de rastreamento. Criar cinco ensaios, com um intervalo inter-julgamento apropriado para a sua experiência. Programa a localização da plataforma e direção começando a discordar de cada tentativa. Ver Tabela 1 para um protocolo de exemplo. Procedimento de teste Transferir os ratos a partir de sua instalação para a sala de comportamento. Manter os ratos em uma área onde eles não podem ver a piscina ou de informações espaciais. Deixe-os ajustar ao novo ambiente por pelo menos 30 minutos antes do teste. Colocar uma bandeira na plataforma para aumentar a sua visibilidade. Para começar a testar, levante rato da gaiola casa pela base da cauda. Apoiar o mouse como você trazê-lo para a área de testes. Levantar o mouse pela base da cauda, ​​coloque delicadamente o mouse para dentro da água, de frente para a borda da piscina. Rapidamente deixar a área de testes. Se o mouse encontra a plataforma antes do sec 60 cut-off, deixe o mouse para ficar na plataforma durante 5 segundos e depois retorná-lo à sua gaiola. Se o mouse não encontrar a plataforma, coloque o mouse sobre a plataforma e permitir que ele fique lá por 20 segundos antes de voltar para sua gaiola em casa. Repita o procedimento para todos os ratos na trilha. Começam cada tentativa subsequente, com uma localização plataforma diferente e direção de partida, como você programou em seu software. Quando o teste estiver completo, o retorno dos ratos para as suas instalações de habitação. Os ratos são secas fora e normotermia é assegurada antes de retornar à facilidade animal. Em preparação para o dia seguinte, retire a bandeira da plataforma e adicionar água para a piscina para submergir a plataforma para um centímetro abaixo da superfície. 3. Dias 2-5: plataforma escondida Programa de computador Carregar a calibração piscina no software de rastreamento. Criar cinco ensaios, com um intervalo inter-julgamento apropriado para a sua experiência. Localização do programa a plataforma a permanecer na mesma posição em todos os ensaios e dias, mas tem a direção de partida são diferentes com cada ensaio, a cada dia. Procedimento de teste Para os ratos pretos, adicione atóxico, branco, pintura a têmpera em pó para a piscina e misture bem. Use bastante pintura de tal forma que a plataforma submersa não é visível a partir da superfície da água. Para ratos brancos, uma piscina de preto com água limpa e uma plataforma de plexiglass transparente deve ser usado. Siga os passos 2.2.3 a 2.2.6. 4. Dia 6: Trial Probe Programa de computador Carregar a calibração piscina no software de rastreamento. Criar um julgamento sem zona de plataforma, e uma direção de partida. A direção de partida mais distante do quadrante plataforma utilizada em 2-5 dias é o preferido. Definir a duração trilha para 60 seg. Procedimento de teste Remova a plataforma da piscina. Siga os passos 2.2.3 a 2.2.6. 5. Análise de dados Para cada dia e cada rato média, os 5 estudos para dar um comprimento de caminho único e latência de escape para cada assunto de teste. Calcular o erro combinado de forma adequada. Para o dia 6, simplesmente recolher o comprimento do caminho, a latência de escape, eo tempo gasto no quadrante da plataforma para cada rato. Se as diferenças existem entre os grupos no 1 º dia, é provavelmente um problema com a visão ao invés de aprendizado e memória. Apenas proceder com a análise se não houver diferenças são vistas no dia 1. Compare as curvas de aprendizagem para os dias 05/02 usando estatísticas adequadas para o seu conjunto de dados. A curva mais íngreme aquisição representa mais rápido tarefa; uma menor curva representa um déficit na aquisição de tarefas. Os dados do dia 2 ao dia 5 são analisados ​​usando ANOWA. Para o dia 6, compare o percentual de tempo gasto no quadrante da plataforma anteriormente aprendidas, usando estatísticas adequadas para o seu conjunto de dados. A maior porcentagem de tempo gasto no quadrante da plataforma é interpretado como um maior nível de retenção da memória. 6. Resultados representante Temos utilizado o teste de labirinto aquático de Morris para examinar o efeito da hipóxia sobre a patogênese da AD (7) e ácido valpróico (VPA) 's potencial farmacêutico para o tratamento AD (6) em camundongos transgênicos modelo AD. Figura 3 é o resultado representante relatamos em nosso estudo sobre o efeito VPA sobre déficits de memória no modelo do rato APP23 AD (6). No dia 1 (ensaios plataforma visível), não há diferença entre o VPA tratados e grupo controle na latência (Fig. 3A) e comprimento do caminho (Fig. 3A), indicando que ambos os grupos têm motor semelhante e as capacidades visual. A partir disso, assume os ratos são capazes de ver a plataforma sinalizadas e as pistas no ambiente circundante, e pode nadar aceitável. Para os dias 05/02 (Dia 1-4 de ensaios plataforma escondida), o exemplo mostra a diferença na latência de escape (Fig. 3C) e comprimento do caminho (Fig. 3D) entre os grupos, sugerindo que os ratos tratados VPA desempenho significativamente melhor do que os controles ao longo do tempo. A sonda resultados fuga no último dia (dia 6) mostram que o número de vezes que os ratos viajou para o terceiro quadrante, onde a plataforma escondida foi previamente colocado, foi significativamente maior com VPA tratamento comparado ao grupo controle (Fig. 3E). Estes dados indicam que o tratamento VPA melhora significativamente a déficits de memória presentes no APP23 camundongos. Figura 1. Configuração de equipamentos para a Água dias Maze teste Morris visível plataforma. A piscina está protegido contra o experimentador usando divisores de quarto. Pistas espaciais estão localizados nas paredes, e talvez colocados no interior da piscina, acima da superfície da água, se desejar. A piscina está cheia com água limpa, com a plataforma situado 1cm acima da superfície. A bandeira foi colocada na plataforma para melhorar a visibilidade. Figura 2. Captura de tela a partir do Qualquer Maze-Tracking System ™ Video demonstrando calibração piscina. A piscina é visto de cima por uma câmera de monitoramento analógico a preto e branco com uma Digitizer RTV24. Várias zonas são definidas dentro do software e do pool total é dividido em quatro quadrantes. Um quinto, zona plataforma está inserida, que pode variar entre ensaios, com cinco localizações possíveis: NW, NE, SW, SE, ou Centro. Uma linha de calibração (linha assinalada através do centro) é adicionado para permitir que o software para converter distâncias pixel em distâncias físicas. Figura 3. Resultados representativos para o labirinto aquático de Morris. O 7 meses APP23 camundongos transgênicos suporte humano sueco gene mutante APP foram testados após um mês de diária VPA (n = 30 ratos) ou solução veículo (n = 30 ratos) injeções. (A) Durante o primeiro dia de testes da plataforma visível, o VPA tratados e controle APP23 camundongos apresentaram uma latência semelhante ao escapar para a plataforma visível. P> 0,05 por aluno t-teste. (B) O VPA-tratados e controle APP23 ratos tiveram semelhante distâncias de natação, antes de fugir para a plataforma visível no teste de plataforma visível. P> 0,05 por aluno t-teste. (C) Em testes plataforma escondida, VPA tratados APP23 ratos mostraram um menor latência para escapar para a plataforma escondida no 3 º e 4 º dia, P <0,001 por ANOVA. (D) A VPA-tratados APP23 ratos tiveram um comprimento menor de natação, antes de fugir para a plataforma escondida no 3 º e 4 º dia, P <0,01 por ANOVA. (E) No julgamento da sonda no dia 6, o VPA-tratados APP23 ratos viajou no terceiro quadrante, onde a plataforma escondida foi previamente colocado, significativamente mais vezes do que os controles. * P <; 0,005 por aluno t-teste. (Adaptado e reproduzido a partir de The Journal of Experimental Medicine 205, 2781-2789, 2008, Rockefeller University Press, Originalmente publicado em Exp Med J. doi:… 10.1084/jem.20081588) (6).   1 dia Dia 2 Dia 3 Dia 4 Dia 5 6 º dia Localização da plataforma Direção de partida Localização da plataforma: SW Começando Localização da seguinte forma: Nenhuma plataforma. Ensaio 1 SW S W N N E N Ensaio 2 NW N S W E S Experimento 3 NE S N E W W O ensaio 4 Centro E E W S E Julgamento 5 SE W S S N N Tabela 1. Amostra de água * protocolo labirinto * Observe como tanto a posição da plataforma e começar mudar de direção no dia 1, enquanto que nos dias 05/02 a posição da plataforma permanece constante, enquanto as mudanças de direcção partida. No dia 6, não existe uma plataforma e um único ensaio. A direção de partida para o dia 6 está mais distante do local da plataforma anterior (SW), para que os ratos devem viajar a alguma distância antes de entrar no quadrante da plataforma previamente aprendido.