Particle Agglutinatie Methode voor Poliovirus Identification
Summary
Een recent ontwikkelde nieuwe deeltje agglutinatie (PA) test gebruik te maken van virus-receptor molecuul toegestaan een snelle en eenvoudige identificatie van poliovirus (PV). In dit artikel zullen we de procedure show voor de PA-test voor PV-identificatie.
Abstract
In het Global Polio Eradication Initiative, laboratoriumdiagnose speelt een cruciale rol door het isoleren en het identificeren van PV uit de ontlasting monsters van acute slappe verlamming (AFP) gevallen. In de World Health Organization (WHO) Global Polio Laboratory Network, PV isolatie en identificatie worden momenteel uitgevoerd met behulp van celkweek systeem en real-time RT-PCR, respectievelijk. In het post-uitroeiing tijdperk van de PV, zou een eenvoudige en snelle identificatie procedures nuttig zijn voor een snelle bevestiging van polio gevallen bij de nationale laboratoria. In de huidige studie, zullen we laten zien van de procedure van nieuwe PA-assay ontwikkeld voor PV-identificatie. Deze test maakt gebruik van PA interactie van PV-receptor (PVR) molecuul en virion die specifiek is en uniforme affiniteit met alle serotypes van het PV. De procedure is eenvoudig (een stap procedure in reactie platen) en snelle (resultaten kunnen worden verkregen binnen 2 uur van de reactie), en het resultaat is visueel waargenomen (waarneming van de agglutinatie van gelatine deeltjes).
Protocol
Discussion
Het unieke punt van deze PA test is het gebruik van de PVR molecuul in plaats van anti-PV-antilichamen voor de detectie van PV-2. Dit maakt een specifieke interactie van de gesensibiliseerde gelatine deeltjes met PV met een uniforme affiniteit voor alle drie serotypen van PV 3-6. We gebruikten een immunoadhesine vorm van PVR (PVR-IgG2a) voor de sensibilisering van gelatine deeltjes, omdat de monomere vormen van PVR slechts matig affiniteiten aan de interne bindingsplaats op het virion (dissociatie constante v…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
We zijn dankbaar Junko Wada voor haar uitstekende technische bijstand. We zijn dankbaar aan Prof Akio Nomoto zo vriendelijk het verstrekken van een baculovirus expressie vector voor PVR-IgG2a. Dit onderzoek werd mede ondersteund door subsidies-in-Steun voor de bevordering van de bestrijding van polio en onderzoek voor nieuwe en opnieuw optredende infectieziekten van het ministerie van Volksgezondheid, Arbeid en Welzijn.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
|---|---|---|---|
| Sensitized-gelatin particles | Fujirebio Inc. | Test kit | |
| Reconstitution buffer | Fujirebio Inc. | Test kit | |
| Microtitration plate | Fujirebio Inc. | Test kit | |
| Anti-PV antibody | RIVM |
References
- World Health Organization. . Polio Laboratory Manual (4th edition) WHO/IVB/04.10. , (2004).
- Arita, M., Masujima, S., Wakita, T., Shimizu, H. Development of a particle agglutination method with soluble virus receptor for identification of poliovirus. J. Clin. Microbiol. 48, 2698-2702 (2010).
- Bibb, J. A., Witherell, G., Bernhardt, G., Wimmer, E. Interaction of poliovirus with its cell surface binding site. Virology. 201, 107-115 (1994).
- Koike, S. The poliovirus receptor protein is produced both as membrane-bound and secreted forms. Embo J. 9. , 3217-3224 (1990).
- Mendelsohn, C. Transformation of a human poliovirus receptor gene into mouse cells. Proc. Natl. Acad. Sci. U S A. 83, 7845-7849 (1986).
- Mendelsohn, C. L., Wimmer, E., Racaniello, V. R. Cellular receptor for poliovirus: molecular cloning, nucleotide sequence, and expression of a new member of the immunoglobulin superfamily. Cell. 56, 855-865 (1989).
- Arita, M., Koike, S., Aoki, J., Horie, H., Nomoto, A. Interaction of poliovirus with its purified receptor and conformational alteration in the virion. J. Virol. 72, 3578-3586 (1998).
- McDermott, B. M., Rux, A. H., Eisenberg, R. J., Cohen, G. H., Racaniello, V. R. Two distinct binding affinities of poliovirus for its cellular receptor. J. Biol. Chem. 275, 23089-23096 (2000).
- Pipkin, P. A., Wood, D. J., Racaniello, V. R., Minor, P. D. Characterisation of L cells expressing the human poliovirus receptor for the specific detection of polioviruses in vitro. J. Virol. Methods. 41, 333-340 (1993).
- Avoort, H. G. v. a. n. d. e. r. Comparative study of five methods for intratypic differentiation of polioviruses. J. Clin. Microbiol. 33, 2562-2566 (1995).
- Kilpatrick, D. R. Rapid group-, serotype-, and vaccine strain-specific identification of poliovirus isolates by real-time reverse transcription-PCR using degenerate primers and probes containing deoxyinosine residues. J. Clin. Microbiol. 47, 1939-1941 (2009).
