Água (Palmatória) Variantes de água rasa testes de labirinto em ratos

1. As piscinas infantis Oxford A piscina infantil tem sido feita de acordo com três projetos sucessivos, Mc 1-3. Todos empregar (2 cm) de água superficial contida em uma base branca (para aumentar a sua aversão), que é rodeado por paredes de Perspex transparente feito de plástico ou de acrílico transparente. Estes têm de verdadeiro / falso sai definidos neles. Os falsos saídas são ocluídas por negros cavilhas de madeira pintados, ao passo que a verdadeira saída está aberta e juntou-se a um tubo de plástico preto, que podem ser removidos com o rato no interior. O mouse é, então, de forma rápida e atraumaticamente retornou à sua gaiola, enquanto no interior do tubo. Depois da primeira publicação do tanque, foi relatado que o retorno para a gaiola casa também era um motivador eficaz para a aprendizagem do labirinto Lashley III 2. A temperatura da água de 20-25 ° C, é utilizado. 20-21 ° C é ideal, tem sido observado que alguns ratos parecem menos motivados a temperaturas mais elevadas. conteúdo "> A primeira labirinto 5 era circular. No entanto, por vezes, ratinhos (particularmente aqueles com lesões no hipocampo) parece não notar o tubo de saída aberta. Um desenho octogonal, com os tubos de saída colocados nos cantos, de modo a atrair o atenção dos ratinhos, melhorou grandemente este problema. No entanto, a taxa de erro no desempenho possibilidade seria 4/trial, em oposição a 6/trial com o desenho circular 12 de tubo. Portanto, um pool de dodecagonal é agora utilizada com 11 e um falso verdadeira saída definido nos ângulos feitos pelos cruzamentos das paredes. 1.1. Evolução e características das piscinas infantis Mc 1, uma piscina circular 85 centímetros de diâmetro, com 12 verdadeiro / falso saídas (Figura 1). Mc 2, uma piscina octogonal 86 centímetros de diâmetro, com oito verdadeiro / falso saídas definidas nos cantos. Mc 3, um (12 lados) piscina dodecagonal 120 centímetros de diâmetro, com 12 true / false exit definido no milhores (Figura 4). Em todos os itens acima (ea remar Y-maze, veja abaixo) os tubos de saída foram 40 mm de diâmetro. No entanto, foi detectada ocasionalmente, que os ratinhos foram relutantes em introduzir estes, e o desempenho do controlo no labirinto Y-se, por vezes, depois de mergulhar que tinham reagido bem. Assim, e considerando quão prontamente eles entraram no aparelho buraqueira (ver publicação JOVE "Avaliando construção de galerias, construção do ninho e acumulação em ratos"), ainda que os orifícios de saída no labirinto Barnes são 50 mm de diâmetro, foi considerado se 40 milímetros era muito pequeno. Um teste foi realizado na gaiola de seis ratinhos C57BL / 6. (Parecem mais pronto para entrar em 40 tubos de milímetro a gaiola de origem presumivelmente como o stress é menor do que em uma parte do aparelho, de modo a fazer o teste da gaiola de origem iria minimizar as diferenças de entrada se os tubos foram ligeiramente menores aversivo, tornando o testar mais conservador). Dois tubos de 40 milímetros e dois tubos de 50 mm foram colocados no chão em umpadrão alternado. Como previsto, houve mais entradas para tubos de 50 mm (28 entradas) de 40 mm (nove entradas). Portanto, testes piloto são planejadas em um novo Y-labirinto com tubos de saída de 50 milímetros, se esta for bem sucedida dos antigos tubos de 40 milímetros na piscina dodecagonal e remar Y-maze serão substituídos por novos 50 milímetros queridos. Como a piscina infantil, remando Y-maze e novidade Y-maze espacial são todos os testes espaciais, contando com a sala de pistas que o mouse enxerga através das paredes transparentes do aparelho, o quarto deve ser bem decorado com sinais distintos (por exemplo, prateleiras, Os armários, as formas de plástico preto nas paredes). 2. Executando a Piscina Infantil Coloque um rato no centro da piscina de frente para um dos quatro posições no perímetro (9, 12 ou 3:00 se o tubo de escape é de 6 horas). A colocação é semi-aleatórios, um máximo de três tentativas consecutivas pode ser na mesma direcção. Isto pode ser difícil de alcançar na prática, porque, comoaprendizado prossegue os ratos tendem a orientar-se para a saída correta, como eles são rebaixados para a piscina pela cauda. Se fizerem isso, também deve ser feita nenhuma tentativa de forçá-los na posição planejada, uma vez que são simplesmente demonstrando aprendizado. Liberá-los quando eles estão um pouco acima da água, como então eles caem e instantaneamente saber que eles não estão mais sendo realizada. Lentamente, liberando-os resultados neles lutando para libertar-se e isso pode prejudicar a orientação inicial. Isto também se aplica a remar Y-maze. Comprimento máximo de julgamento é de 60 segundos. Se o mouse não consegue escapar até então, guiá-lo manualmente para a saída usando um par de remos perspex claro, cada uma medindo cerca de 30 x 20 cm. As medidas tomadas são o tempo para encontrar a saída (definição: toda a cabeça dentro do tubo) e erros. Erros foram definidos como vem dentro do comprimento de uma cabeça de um tubo (incluindo o real saída). Passando por perto a verdadeira saída, sem entrada, geralmente ocorre infrequently após os primeiros ensaios. Apesar de um caso pode ser feito que este é um problema, uma visão alternativa é que os ratos com deficiência na cognição espacial fazer isso, porque eles não sabem que há uma saída por aí. Controles sei, e, portanto, investigar mais detalhadamente. Um limite máximo de 11 ensaios / erros é imposto sobre o número de erros na análise, para impedir que muita inclinação dos dados. Isso mitigar contra um déficit, sendo encontrado em camundongos espacialmente com deficiência, ou seja, é uma medida conservadora. Ratos que não conseguem alcançar a saída dentro de 60 segundos são atribuídos uma pontuação de 11 erros para que julgamento. Então, 60 seg vezes sempre tem 11 erros. 3. O Y-maze Palmatória Para simplificar o procedimento piscina infantil e do aparelho foi decidido a experimentar com a Y-maze, operado de acordo com os mesmos princípios que as piscinas infantis. O aparelho é constituído por três braços de poliestireno ou de perspex transparente, a cada 30x 8 x 20 cm. Esta é montada sobre uma base branca (Figura 7). O branco foi escolhido para maximizar a aversão a cor de chão e assim encorajar a fuga do raso (2 cm de profundidade). Como no labirinto da água, existe apenas uma verdadeira saída, com os outros dois braços, que encerra em falsas saídas têm a mesma aparência que a partir do interior do labirinto (Figura 8). Executando a remar Y-maze Coloque um rato, no final de um dos braços fechados, de costas para o centro. A sequência de braços escolhido como a posição de partida é definida por uma sequência de semi-aleatórios, não mais do que três tentativas consecutivas com a mesma posição, e um número igual de os braços esquerdo e direito. Cada prova tem a duração de 60 segundos. Se o rato não consegue sair (cabeça inteira no tubo de saída) dentro deste tempo incentivar a entrar no braço com o auxílio de uma peça de perspex transparente. A base do braço de saída está bloqueada pelo perspex e permitiu o rato para a saída encontra por si só, istodeve incentivar a aprendizagem melhor do que empurrá-lo para a direita no tubo. Mas isso pode ser necessário recorrer a se o rato é relutante para entrar no tubo depois de 15 seg. Tomar medidas do tempo total para sair eo número de erros (corpo inteiro sem cauda entra em um braço blind). Marcando a remar Y-maze Existem duas definições de um ensaio correcto: em primeiro lugar, uma em que o rato encontra a saída em <60 seg e não faz entradas nos braços cegos, com erros ser marcado, se os braços cegos são inseridos e / ou se a saída não se encontra dentro de 60 seg. Esta análise confunde falhas para começar a mover-se com erros de entradas nos braços. Em segundo lugar, uma análise experimental que enfatiza a capacidade cognitiva pode ser realizada através da exclusão, para cada rato, todos os ensaios em que o rato não deixou o braço de início dentro de 60 segundos (ou seja, excluir todos os 0 60 pontos), em seguida, calcular a% de acerto da restantes ensaios. 4. Dois tipos de Y-mazeCombinado 1. Aparelho Ao construir um tanque Y-maze, é útil para incorporar duas portas para permitir que ele seja executado como um (a seco) espacial novidade experimento memória 6 (Figura 13). Uma porta de guilhotina transparente cobre o orifício de saída na parede de extremidade do braço de saída, enquanto uma porta de guilhotina opaco pode ser inserido para vedar de um braço do outro dois durante a fase de recolha de amostras do ensaio. É importante que os corredores para essas portas não estão ao alcance dos ratos, caso contrário, eles podem desviar sua atenção, porque eles parecem possíveis rotas de fuga. Idealmente devem estender 7 centímetros para baixo a partir do topo da parede do labirinto. 2. Set-up Coloque um (0.5 cm) de camada fina de madeira de material de cama de chip no chão do Y-maze. Este é redistribuído entre as duas fases de teste para os ratos individuais, e entre ratos. Para as melhores práticas, para tornar o ambiente olfativo more semelhante para os primeiros contra subseqüente ratos, colocar um ou dois ratos não-experimentais no labirinto por alguns minutos antes do experimento começa. 3. Procedimento Com o braço de saída bloqueada pela porta opaca e seu orifício de saída bloqueado pela porta transparente, colocar o rato no braço de início (um dos dois braços não-saída do labirinto) e permitir que ele explore durante 5 min. Em seguida, removê-lo, levantar a porta opaco para permitir o acesso a todos os três braços, substituí-lo no braço do início e observá-lo durante 2 min. Observe que o número de entradas e o tempo despendido em cada braço. Camundongos de controle deve se lembrar que os primeiros dois braços, e passar mais tempo no braço anteriormente inacessíveis.