Summary

開発ゼブラフィッシュ前脳におけるクローン関連の神経前駆細胞のタイムラプスライブイメージング

Published: April 06, 2011
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Summary

現在のビデオは、開発ゼブラフィッシュの脳内の個々の神経前駆細胞のライブイメージングを実行するためのエレクトロポレーション、共焦点顕微鏡の組み合わせを活用する方法を示しています。<em> in vivoで</emクローンレベルで前脳の神経前駆細胞の発達の>分析は、この方法で達成することができます。

Abstract

神経前駆細胞の分裂、遊走や分化の正確なパターンは、適切な脳の発達と機能の1,2に不可欠です。 生体内環境における複雑な神経前駆細胞の挙動を理解するために、無傷の脳内の神経前駆細胞のタイムラプスライブイメージングは、批判的に必要となります。このビデオでは、我々はin vivoでの脳の神経前駆細胞の発達を視覚化するためにゼブラフィッシュ胚のユニークな機能を利用する。我々は遺伝的にとまばらに個々の神経前駆細胞を標識するためにエレクトロポレーションを使用してください。簡単に言えば、DNAは、蛍光マーカーのためのコーディング構造22時間後に受精の前脳の脳室に注入した(HPF)ゼブラフィッシュの胚と電気パルスは即座に配信されていました。 6時間後、エレクトロポレーションゼブラフィッシュの胚をガラス底の培養皿に低融点アガロースでマウントされた。蛍光標識した神経前駆細胞は、水浸対物レンズを用いて共焦点顕微鏡下で一定の間隔で36hoursのために画像化した。本方法は、前脳の神経前駆細胞のin vivoでの開発洞察を得るために手段を提供し、ゼブラフィッシュの胚の中枢神経系の他の部分に適用することができます。

Protocol

1。ゼブラフィッシュ胚の調製エレクトロ二日前、女性とは別の男性にディバイダを使用して、野生型の魚の交尾ケージを設定。 エレクトロポレーションの前にある日は、前日からケージを交配することで仕切りを引き出します。 胚を収集し、28.5で0.003%フェニルチオ尿素(PTU)を含む30ミリリットル胚培地℃で50受精胚をインキュベートエレクトロポレーション?…

Discussion

このビデオでは、我々は開発ゼブラフィッシュの脳のクローンレベルでの神経前駆細胞のタイムラプスライブイメージングのための方法を示しています。我々はテストされ、既存のエレクトロポレーションプロトコル4-6遺伝的および蛍光個々の神経前駆細胞を標識するように変更。少数の細胞がまばらにエレクトロポレーションの相対的な低電圧で標識されて以来、クローン的に関?…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

この作業はtheNIH grantNS042626によってサポートされていました。我々は、クルトソーンとイメージングの支援のためのUCSFニコンイメージングセンターに感謝します。

References

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Cite This Article
Dong, Z., Wagle, M., Guo, S. Time-lapse Live Imaging of Clonally Related Neural Progenitor Cells in the Developing Zebrafish Forebrain. J. Vis. Exp. (50), e2594, doi:10.3791/2594 (2011).

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