Kasık lenf düğüm intravital Mikroskopi
Summary
Inguinal lenf nodu (LN) intravital mikroskopi gerçekleştirmek için bir teknik özetlenmiştir. Böyle bir tekniği, gerçek zamanlı sağlar.<em> In vivo</em> Homeostazı ve enfeksiyon sırasında her iki lenf düğümü mikrovasküler ve yapı çalışması. Bu teknik, hücre ticareti çalışmaları ve diğer lenf nodu sitelerine adapte edilebilir.
Abstract
Vücutta bulunan lenf düğümleri (LN), bağışıklık sisteminin bir parçasıdır. Bu nedenle, adaptif bağışıklık yanıtının indüksiyonu için bir site olarak hizmet ve efektör hücrelerinin gelişimi. Bu nedenle, LN, işgalci patojenlere mücadele ve sağlığı korumak için kilit öneme sahiptir. Erişilebilirlik ve istenilen model LN çalışmaya seçimi dikte kasık lenf düğümü yer alır ve kolayca biyolojik ilgili modelleri, cilt ve genital mukoza enfeksiyon çalışmaları destekler.
Inguinal LN LN gibi kan ile besleyen geniş bir mikrovasküler ağına sahiptir. Genel olarak, bu mikrovasküler ağ, yüksek endotelyal venüller (HEVs) beslemelerini daha sonra şube ve LN ana besleme arteriyol içerir. HEVs homeostazı ve enfeksiyon sırasında bağışıklık hücrelerinin LN ticareti kolaylaştırmak için uzmanlaşmıştır. HEVs Bu koşullar altında LN ticareti düzenleyen Nasıl bir alanda yoğun bir keşif. LN linki arteriyol, üzerinde doğrudan HEVs upstream etkisi vardır ve içine besin ve hücre açısından zengin kan LN ana kaynağı. Ayrıca, yem arteriyol değişiklikleri adaptif bağışıklık yanıtının indüksiyonu kolaylaştırmak sorumlu tutulmaktadır. LN mikrodolaşımını LN optimal kan kaynağının korunması ve uygun LN fonksiyonu ve daha sonra bağışıklık yanıtının önemli unsurlardır LN, bağışıklık hücre akını düzenleyen açık bir öneme sahiptir.
In vivo LN mikrodolaşımını çalışma yeteneği, bağışıklık sistemi ve mikrovasküler etkileşim ve LN içinde bir başka etkisi nasıl nedenlerine açıklık anahtar . Burada, kasık lenf nodu in vivo görüntüleme için bir yöntem mevcut. Biz, sağlıklı çalışma gemilerin, birkaç saat boyunca canlı damarlarının görüntülenmesinde korumak için yeteneği ve geminin büyüklüğü ölçümü sağlamak yöntemlerine özel önem vererek, LN mikrovaskuleterini görüntüleme odaklanır. Vazoaktif ilaçlar ile mikrovasküler perfüzyon gibi hücresel trafiğini izlemek ve ölçmek için potansiyel yöntemleri de sunulmaktadır.
Inguinal LN intravital mikroskopi mikrovasküler işlevsellik ve bağışıklık hücreleri, LN, mikrosirkülasyon arasında doğrudan bir arayüz, gerçek zamanlı arayüzü doğrudan değerlendirme sağlar. Bu teknik potansiyel birçok immünolojik teknikler ve yanı sıra diğer LN damarsal çalışma manipüle floresan hücre etiketleme ile kombine edilebilir.
Protocol
Discussion
Burada sunulan inguinal lenf nodu intravital mikroskopi lenf nodu in vivo görüntü mikrodolaşımını yeteneği sağlar. Bu nedenle, doğrudan, gerçek zamanlı gözlem aracı kolaylaştırır. LN mikrodolaşımını Görüntüleme bir immün yanıt ve damarsal arasındaki arayüz çalışma sağlayan benzersiz bir site. Bu preparatın kullanarak, bağışıklık yanıtı, damarsal değişiklikler, ya da ikisi arasındaki etkileşimi odak özellikle yönlendirilmiş olabilir.
Tüm deneysel yaklaşımlar olduğu gibi, standart intravital mikroskopi hem avantajları ve sınırlamaları vardır. Hazırlanması burada açıklandığı gibi Standart IVM, kolayca değiştirilebilir, ve daha önce, tanıtım veya floresan tracer boyalar etiketli hücre popülasyonlarının üzerinden epifluorescent mikroskobu izin yazarlar tarafından ortaya konmuştur. Standart IVM, üç boyutlu görüntüleme olanağı vermek ve iki foton mikroskopi veya anjiyografi ile verilecekti gibi izleme rağmen, hücre izleme hücre-hücre ve hücre-vasküler bir etkileşim olmasını sağlayan iki boyutlu olarak elde edilir gözlenen ve rakamsal ve floresan antikorlar in vivo yönetimi ve daha sonraki boyama ile birlikte, gerçek zamanlı olarak protein / işaretleyici ifade veri vermek için kullanılabilir .
Özellikle, görüntüler için alternatif görüntüleme teknikleri statik bir ortam gerektirir; sık cerrahi alan veya düz bir hazırlık lamel ek sıkma tabi. Bu sınırlar, değilse aktif vasküler bütünlüğü ve fizyoloji vb veya IVM hazırlığı içinde yapılan vazodilatasyon deneyleri gibi diğer tekniklerin kullanımı değerlendirmek için hazırlık içinde vasküler veya diğer mediyatörler serpmek yeteneği ortadan kaldırır. Ayrıca, standart IVM tamamen düz bir hazırlık gerektirmez ve hayvanın nefes tarafından oluşturulan gibi hareket etkilenmez. Bu standart IVM büyük tekrarlanabilirlik ile daha fazla cerrahi alanlarda kullanılmasına izin verir. Bu, burada açıklanan kasık lenf nodu hazırlık örneklediği. Lenf nodu boyutu ve şekli göz önüne alındığında, hazırlık dokuya zarar vermeden düz yapılabilir edemez ve düğümün konumu nedeniyle önemli bir hareket hayvan solunum yol açmaktadır. Bu tür konularda diğer yöntemlerle üstesinden gelmek için zor olacağını, ancak açıklanan standart IVM hazırlık ile kolayca dağıtılır.
Özet olarak, yukarıda ayrıntılı olarak hazırlanması, herhangi bir sayı ile kombine edilebilir diğer biyokimyasal, vasküler ve / veya aktive altkümelerini transferi veya etiketli hücreleri, hipoksi indüksiyonu ve vasküler arabulucular tükenmesi üzerinde ifade gibi immünolojik teknikleri. Ancak, ek uygulamalar ilk hazırlık sağlık bağlıdır. Bu nedenle, her zaman görüntülü ve değerlendirilmektedir damar sağlığını test etmek için hayati önem taşımaktadır. Bir sağlık hazırlığı ulaşmak için kilit noktaları hazırlanması sürekli vücut ısısı dengelenmiş PSS ile perfüze ve ameliyat sırasında cerrahi alana yerleştirilen temas ve stresi en aza indirerek sağlamak.
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Bu çalışma, Kanada Sağlık Araştırma Enstitüleri, Kanada, British Columbia Merkezi Üniversitesi İnovasyon, Kan Araştırma ve Kuzey M.Ö. Üniversitesi Vakfı tarafından finanse edilmektedir.
Materials
| Name of the reagent | Company |
|---|---|
| Sodium Bicarbonate | Sigma Aldrich |
| Sodium Chloride | Sigma Aldrich |
| Potassium Chloride | Sigma Aldrich |
| Calcium Chloride Dihydrate | Sigma Aldrich |
| Sodium Nitroprusside | Sigma Aldrich |
| Phenylephrine | Sigma Aldrich |
| Acetylcholine | Sigma Aldrich |
| Magnesium chloride heptahydrate | Sigma Aldrich |
| Sodium Pentobarbitol |
References
- Bearden, S. E., Payne, G. W., Chisty, A., Segal, S. S. Arteriolar network architecture and vasomotor function with ageing in mouse gluteus maximus muscle. J Physiol. 561, 535-545 (2004).
- Looft-Wilson, R. C., Payne, G. W., Segal, S. S. Connexin expression and conducted vasodilation along arteriolar endothelium in mouse skeletal muscle. J Appl Physiol. 97, 1152-1158 (2004).
- Payne, G. W., Madri, J. A., Sessa, W. C., Segal, S. S. Histamine inhibits conducted vasodilation through endothelium-derived NO production in arterioles of mouse skeletal muscle. Faseb J. 18, 280-286 (2004).
- Smeda, J. S., Payne, G. W. Alterations in autoregulatory and myogenic function in the cerebrovasculature of Dahl salt-sensitive rats. Stroke. 34, 1484-1490 (2003).
- de With, M. C., de Vries, A. M., Kroese, A. B., van der Heijden, E. P., Bleys, R. L., Segal, S. S., Kon, M. Vascular anatomy of the hamster retractor muscle with regard to its microvascular transfer. Eur Surg Res. 42, 97-105 (2009).
- Domeier, T. L., Segal, S. S. Electromechanical and pharmacomechanical signalling pathways for conducted vasodilatation along endothelium of hamster feed arteries. J Physiol. 579, 175-186 (2007).
