Proteomik Analizi İnsan Vitreus Gövde Elemanları diseksiyonu
Summary
Bu video post-mortem gözünde, insan vitreus vücudunun çeşitli yarı saydam yapıların ayrılması ve diseksiyon için etkili bir teknik gösterir.
Abstract
Vitreus, göz ve retina üzerinde yer içini doldurur optik açık bir kollajenöz ekstrasellüler matriks, vitreus altyapılar ve retina arasında 1,2 Anormal etkileşimleri retina yırtığı ve dekolmanı, maküler pucker, makula deliği dahil olmak üzere birçok vitreoretinal hastalıkların , altında yaşa bağlı makula dejenerasyonu, vitreomaküler çekiş, proliferatif vitreoretinopati, proliferatif diyabetik retinopati ve miras Vitreoretinopatilerde. 1,2 vitreus altyapılardan moleküler kompozisyonu bilinmemektedir. Vitreus sınırlı cerrahi erişim ile şeffaf olduğundan, moleküler düzeyde altyapılar incelemek için zor olmuştur. Proteomik ve biyokimyasal analiz için ayrı ve bu dokuları korumak için bir yöntem geliştirdi. Bu deneysel video diseksiyon tekniği, vitreus tabanı, anterior hyaloid, vitreus çekirdek ve postmortem insan gözü vitreus korteks izole etmek için nasıl gösterir. Her vitreus bileşeni tek boyutlu SDS-PAGE analizleri bizim diseksiyon tekniği, insan vitreus vücudunun her bir altyapı karşılık gelen dört benzersiz protein profilleri yol açtığını gösterdi. Farklı bölümlere proteinlerin belirlenmesi, aday molekülleri çeşitli vitreoretinal hastalıkların altında yatan ortaya koyacaktır.
Protocol
Discussion
Vitreus tabanı, çekirdek, korteks, anterior hyaloid: vitreus moleküler bileşimini özellikle altyapılardan düzeyinde yeterince anlaşılır bir yarı saydam bir jel. Vitreus çekirdek diyabetik retinopati gibi hastalıklar ile ilişkili olduğu, kondroitin sülfat proteoglikanlar, heparan sülfat proteoglikanların, ve vitreus çekirdek hyaluronan 1,2 Protein biyobelirteçleri ile birlikte kolajenlerin II, V, IX, ve XI içerir. 3-5 nasıl Bu proteinlerin farklı altyapılardan, her ifade ve özel protein kimlikler, birçok durumda bilinmemektedir. Bu ayrıntıları belirli Vitreoretinal hastalıklar ile ilişkili proteinlerin kökenini fikir vermek ve hedef gelecekte tedaviler yardımcı olabilir. Doku diseksiyonu için optimum post mortem aralığı tespit edilmemiş olmasına rağmen, protein bozulması downstream deneyler etkileyebilir. Örneğin, 12 saatlik postmortem gözünde immünohistokimya etkilenir ve bazı özel enzim aktiviteleri (basılmamış gözlem), birkaç saat içinde azalabilir. Bu çalışmada tüm dokuların protein ekspresyonu veya proteomik analsyis uygunluğu önemli değişiklikler olmadan ölüm 2 ve 8 saat arasında toplanmıştır. Korunması sıvı nitrojen dondurma yöntemi fiksatif çapraz bağlama, diğer dokularda LC-MS/MS tarafından kanıtlanmıştır neden protein yapısındaki küçük değişiklikler önlemek için fiksasyon üzerinde seçilen 6 Proteomik çalışmalar doğru bir şekilde yeteneğine bağlıdır Bu video deneyde ortaya vitreus farklı bölmeleri, teşrih. SDS-PAGE 1-boyutlu diseksiyon tekniği kullanılarak valide var. Sonuçlar, farklı çeşitli vitreus altyapılar proteinlerin ifade edilir. Bu proteinlerin belirlenmesi vitreus bölümlendirme daha ayrıntılı bir anlayış sağlayacak.
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Finansman Fight for Sight tarafından sağlanan. Dokular Iowa Lions Göz Bankası elde edildi.
Materials
| Name | Company | Catalog Number |
| 0.12 forceps | Storz Ophthalmics | E1502 |
| 5-cc syringe | Becton-Dickinson | 309603 |
| Straight Dressing Forceps With Serrations | Storz Ophthalmics | E1400 |
| 23 gauge needle | Becton-Dickinson | 305145 |
| Colibri forceps | Storz Ophthalmics | 2/132 |
| Castroviejo angled corneal scissors | Storz Ophthalmics | E3223 |
| Vannas Curved Capsulotomy Scissors | Storz Ophthalmics | E3387 |
| Weck-Cel surgical spears | Medtronic | 0008680 |
| Westcott Curved Tenotomy Scissors | Storz Ophthalmics | E3320 |
References
- Bishop, P. N. Structural macromolecules and supramolecular organisation of the vitreous gel. Prog Retin Eye Res. 19, 323-344 (2000).
- Sebag, J. Molecular biology of pharmacologic vitreolysis. Trans Am Ophthalmol Soc. 103, 473-494 (2005).
- Yoshimura, T. Comprehensive analysis of inflammatory immune mediators in vitreoretinal diseases. PLoS One. 4, e8158-e8158 (2009).
- Gao, B. B., Chen, X., Timothy, N., Aiello, L. P., Feener, E. P. Characterization of the vitreous proteome in diabetes without diabetic retinopathy and diabetes with proliferative diabetic retinopathy. J Proteome Res. 7, 2516-2525 (2008).
- Izuta, H. Extracellular SOD and VEGF are increased in vitreous bodies from proliferative diabetic retinopathy patients. Mol Vis. 15, 2663-2672 (2009).
- Azimzadeh, O. Formalin-fixed paraffin-embedded (FFPE) proteome analysis using gel-free and gel-based proteomics. J Proteome Res. 9, 4710-4720 (2010).
