人类蛋白质组分析玻璃体元素剖析

1。眼前段解剖。 角膜是首先在角膜缘切口使用15 °刀片（图1）进入前室，中删除。然后一个弧形角膜巩膜剪刀的刀片插入前房。圆周削减是在角膜上，角膜缘前。 0.12科利柏钳和韦斯科特剪刀用于切割虹膜睫状体周前。 晶状体核与0.12科利柏钳或15 °刀片（supersharp）和钳皮层与胶囊被删除。 2。玻璃体核心的愿望。 一个23号针头，5毫升注射器插入中期玻璃体（图1）。 约1毫升或玻璃体核心是轻轻吸气。 样本，然后放置在离心管中，再放入液态氮。 3。前部玻璃体剥离。 通过调整入射光从鹅颈显微镜光前玻璃体被看作是一个半透明的戒指。前吸玻璃体核心分开便于识别的其他结构的前玻璃体。 弹性组织的表仔细拉到远离科利柏或敷料钳睫状体和切Vannas剪刀。这一演习是重复的。 样本，然后放置在离心管中，再放入液态氮。 4。玻璃体基底部夹层。 使用0.12钳稳定眼罩，韦斯科特剪刀用“花”的眼睛，使四个等距的减压削减对视神经头睫状体。 睫状体平坦（图2）蚌是从每个象限使用韦斯科特剪刀。 玻璃体基底部，然后抓住钳在玻璃体和视网膜（图2）锯齿缘两侧。 玻璃体基底部的持续牵引，应用镊子。韦斯科特剪刀连续切割提取“珍珠串”的外观，半透明的组织，因为它是切除。 样本，然后放置在离心管中，再放入液态氮。 5。玻璃体皮质去除。 韦斯科特剪刀每个象限切除玻璃体切割后的锯齿缘（图2）单张约3毫米。 组织之间的传单，玻璃体皮质可视化的半透明膜。 0.12钳或弹性薄膜是抓住坚持一个Weck – CEL手术海绵举行。然后拉到远离视网膜玻璃体皮质韦斯科特剪刀（图1）切除。 样品放置在离心管中，再放入液态氮。所有样本保存于-80℃直至实验利用。 6。代表性的成果组织样本，可以处理各种具体的实验方法。在我们的例子中，样品进行蛋白质分析提交经SDS – PAGE（图3）。 图1。横断面人眼玻璃体描绘不同的子结构，最前部玻璃体是一个薄的胶原层，被称为前玻璃体。玻璃体核心包括整个中部地区的玻璃体。这部分的玻璃体是对比，这是足够的粘性，要把握钳和牢固地附着在底层的睫状体和视网膜玻璃体基底部的水。涵盖玻璃体的核心是一个非常薄的的称为玻璃体皮质的胶原外壳。 图2。玻璃体基底部的解剖结构。玻璃体基底部是沿锯齿缘（白色箭头），这是政企分开，睫状体和视网膜的分界线位于玻璃体半透明的下层结构。玻璃体基底部前缘延伸至睫状体玻璃体（白线）。玻璃体基底部后缘延伸2 – 3毫米，后到锯齿缘（白色虚线）。切除玻璃体基底部，镊子是用来把握组织和拉动了从底层的睫状体和视网膜。一旦升高，韦斯科特剪刀用于切割沿基地。 图3。一维玻璃体元素SDS – PAGE前玻璃体总蛋白的浓度，玻璃体基底部，维生素reous核心，玻璃体皮质分别为11.24，20.1，16.61，14.24毫克/毫升，分别。在200千伏为45分钟，凝胶电泳，染色与火烈鸟（BIO – RAD），和可视化使用VersaDoc成像系统（BIO – RAD）。为不同组织的剖面显示几个类似的乐队，说明无论是保守或交叉污染的蛋白质，以及独特的频带（星号），表明不同的本地化的蛋白质。