抗原特異的インビボでのキリングアッセイ
Summary
多くの感染症は、強力なCTL応答を誘発するが、時折、応答する細胞の量は、病原体の制御に相関しない<sup> 1</sup>。 CTLの質の1つの尺度は具体的に死滅させる能力です。<sup> 2</sup>。標的細胞のCFSE標識は、このCTL応答の品質を調査するために使用することができます<em> in vivoで</em<sup> 3,4</sup>。
Abstract
カルボキシフルオレセインジアセテートスクシンイミジルエステル（CFSE）を容易かつ迅速に生体内での調査のための関心の細胞集団を標識するために使用することができます。この標識は、古典的な増殖と移動を研究するために使用されています。ここで紹介した方法では、我々は、エピトープの特定のCFSE標識した標的細胞を4-6の生存と殺害を見に養子移入した後にタイムラインを短縮している。その量は、誤解を招く可能性があるとしてCD8 + T細胞クローンの特定の殺害のレベルは、応答の質を示すことができます。特定のCD8 + T細胞はサイトカイン産生と7,8を殺すの低下と時間をかけて機能的に枯渇することができます。また、特定のCD8 + T細胞クローンは、異なるTCRの特異性9と同様に他人を殺すしないことがあります。効果的な細胞性免疫（CMI）の場合、抗原はT細胞の応答の適切な数字だけでなく、機能的に堅牢な応答性T細胞だけを作り出すことを識別する必要があります。ここでは、BALB / cマウスに2つのペプチド特異的T細胞クローンのパーセントの細胞特異的殺傷を評価する。
Protocol
Discussion
CFSEは子孫10,11の間で比較的均等に分割するので、このアッセイは、クローン性増殖を含む細胞の増殖能を調査するように変更することができます。また、CFSE標識と組み合わせることができる例の四量体および生物発光13あなたの仮説に応じてより適切な方法をトレースし、他のセルが、、ありますがそれは、細胞遊走6,12を調査するためにラベル付けCFSEを使用するこ?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
私は免疫学的アッセイやマウス操作に私を導入するためビアンカMOTHE、カルラOseroff、とマリー=フランスDelGuercioに感謝したいと思います。 GAスプリッタのラボでの作業は、NIHの助成金1 – RO1 – AI – 073558、GLRCE助成1 – U54 – AI – 057153、およびBARD US – 3829から06によって運営されている。
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| 1 mm glass beads | Biospec Products | 11079110 | ||
| 70 μm cell strainer | BD Falcon | 352350 | ||
| 96-well plate | Costar | 3799 | ||
| Adjulite Incomplete Freund’s Adjuvant | Pacific Immunology | n/a | ||
| DMSO | Sigma | D-5879 | ||
| FBS | GIBCO | 16000-077 | ||
| FC 500 Flow Cytometer | Beckman Coulter | n/a | ||
| Kontes glass tissue grinder | Kontes | 885300-0015 | ||
| Mini Beadbeater | Biospec Products | n/a | ||
| Needle | B-D | 305175 | ||
| Parafilm “M” | Pechiney Plastic Packaging | PM992 | ||
| Paraformaldehyde | Electron Microscopy Sciences | 157-8 | ||
| PBS | GIBCO | 10010-023 | ||
| PharmLyse lysing reagent | BD Biosciences | 555899 | ||
| RPMI 1640 | GIBCO | 11875-093 | ||
| Syringe | B-D | 309602 | ||
| Vybrant CFSE Kit | Invitrogen (Molecular Probes) | V12883 |
References
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