活体成像和治疗卵巢癌的原位小鼠模型

一，卵巢肿瘤细胞的制备在文化表达荧光素酶的成长卵巢癌的细胞株。荧光素酶的来源可以是萤火虫，海肾，或其他物种。也可用于荧光蛋白的表达。对于本演示中，我们使用的卵巢癌的细胞株，OVCAR5，表达萤火虫荧光素酶。 收获细胞，用常规的细胞培养技术。 保持细胞悬液（10,000个细胞/μL）的磷酸盐缓冲液（PBS）冰直到注射时间。 二。 Intrabursal注射液这个过程需要从第二个人的援助。所有的外科手术是在无菌条件下进行。这包括穿着手术的装束和使用无菌手术器械，注射器和针头。 准备3毫升（100毫克/毫升）的盐酸氯胺酮，甲苯噻嗪盐酸1.6毫升（100毫克/毫升），1.5毫升（10毫克/毫升）acepromazine，20毫升0.9％氯化钠混合麻醉的解决方案。 检查动物的识别号码和观察到的健康。麻醉与氯胺酮 – 甲苯噻嗪- acepromazine准备麻醉（IP）经腹腔注射给药量为8〜9毫升/公斤体重（BW）的动物。 通过与动物的后爪钳或手指脚趾捏，确认该动物是在接受麻醉平原。如果有脚蹬反射，等待麻醉进行更深层次的平原，直到动物是这个程序没有响应。 动物背侧上对着它的头和它的尾巴向你面临的无菌纱布垫。切口点位于左边或右边卵巢和中线以上。刮胡子或湿用70％酒精在切口点皮毛。 抬起湿润的皮肤使用镊子，做一个小切口用剪刀在背内侧的位置，并直接卵巢脂肪垫以上。卵巢脂肪垫下方的腹腔壁的表面应该是可见的。脂肪垫很容易识别的白色在它周围的暗粉色组织。 轻轻抬起腹腔壁衬，如上所述，做一个小切口（5）。 中线切口旁放置一个无菌浸泡盐水纱布垫。找到卵巢脂肪垫，轻轻将其拉出上的纱布和休息。卵巢稳定夹紧牛头犬剪辑的脂肪垫。卵巢在解剖显微镜下，位置，让针插入输卵管小管弯曲，导致滑囊（规格30，G）的。当针插入到适当的位置，应该滑囊下可见。 轻轻推注射器推杆注入5μL的细胞悬液之间的布尔萨和卵巢，而注射器注射部位定位。这一步需要两个人。一人推柱塞，而其他人保持针的定位。迅速取出针头穿刺部位的密封，但轻轻足够不要撕破滑囊和肾小管。滑囊应该会出现适当注射要稍微扩张。 推出猛犬剪辑的脂肪垫，轻轻地取代生殖道进入腹腔的脂肪垫回。轻轻合上腹膜衬拉衬在较低的体壁。关闭手术订书钉或伤口剪辑皮肤。 将复苏的动物在笼子里，并提供一个安全的热源，以避免低温和加快恢复。监测呼吸频率和易用性，肌张力的回报，并自愿移动的能力。这是走向复苏的进展的良好指标。订书钉或伤口剪辑可以去除手术后7天或以上。 三。口服灌胃给药 18〜20 G灌胃针或鼻饲管使用一个圆形的提示。灌胃针应不再比从动物的头尖的最后一根肋骨的距离。 检查动物的识别号码和观察到的健康。轻轻地用拇指和手指的肩膀皮肤抓住颈背的动物。克制应该只是公司中脱颖而出四肢延伸到每一个侧面和出路。动物不应该能够把握针。 动物的头，用食指轻轻拉了回来，形成了直线通过颈部和食管。支持你的拇指内的动物的回。 轻轻的和没有力量的，插入口两侧和舌头在灌胃针。在一个平滑的运动，应通过对针口的屋顶上下食道。重力应引导针没有会议抵抗。如果有任何resistanCE，取出针，并再次启动。动物的插科打诨和吞咽反射可能会触发插入时。但是，应无阻力或动物喘气。重要的是要确保动物呼吸时，针在被检查的鼻孔和胸部的运动。 慢慢推注射器的柱塞免除剂量体积。 灌胃针头轻轻地取出它插入食道的方式在同样的角度和途径。 5〜10分钟，动物笼子里，并监测呼吸和行为。 四， 在活体成像我们用卡尺生命科学监察注入intrabursal腔细胞的行为。使用此系统的实验通常有4〜16周的时间内从肿瘤植入时间。 准备的D -荧光素（萤火虫荧光素酶的底物）的解决方案，通过溶解在1 mL PBS 5〜20毫克，并通过杀菌为0.22μm滤膜过滤。 充电打开的氧气和异氟醚气体感应室。接通到感应室的气体流量。异氟醚的流量维持在低水平，直到动物准备进行成像。 检查动物的识别号码和观察到的健康。放置在被控异氟醚气体感应室的动物。 从室中取出的动物，当动物出现被麻醉。交付200μL准备通过IP使用30克针注射荧光素的解决方案。重要的是要记录注射时间，以保持一致的时间之间的荧光素注射和整个研究的成像性能。 放置到感应室的荧光素注射的动物的回。 成像系统设置相应的设置。要确保系统初始化之前获得的第一个动物形象。 关掉煤气流感应室和成像室的气体流量。 麻醉动物的背侧或腹侧了。请务必放置在鼻锥动物的鼻子，以保持适当的麻醉诱导。确保绿色照明“兴趣点网格”内的动物。 关闭室的大门，并在适当的时候获得的图像。时间可以由动力学。 从成像室取出的动物放到它的笼子。监视“Intrabursal注射液”中描述的动物的恢复。 五，代表性的成果 图1。卵巢肿瘤细胞原位小鼠模型的体内成像。 intrabursally OVCAR5细胞表达荧光素酶注射到右侧卵巢，并随着时间的推移成像。图片13（左），17（中），和22（右）天后注射使用IVIS光谱成像系统。在上游面板背侧和腹侧在较低的面板。请注意，腹膜肿瘤细胞的扩散，注射后22天。 福克斯蔡斯癌症中心的机构动物护理和使用委员会规定的准则和法规的规定进行动物实验。