从一个暗适应切片制备小鼠视网膜神经细胞的膜片钳录音
Summary
在这里，我们描述了产生暗适应对小鼠视网膜电生理记录片的过程。
Abstract
启动时，在我们的视网膜感光细胞的视色素吸收光能量的光子，并启动一个封闭的环核苷酸门控通道在细胞膜，导致细胞内事件级联我们的视觉体验。膜电位的变化，导致神经递质的释放杆和锥突触终端数量的减少反过来。为了测量在感光膜电位光诱发的变化如何导致在视网膜上下游活动，科学家们从几十年 1,2的视网膜切片准备的电生理记录。在过去，这些片被切断与视网膜组织，是连接到滤纸上的刀片手动，近年来已开发的另一种方法的切片，使视网膜组织中嵌入胶凝温度琼脂低和在阴凉的解决方案与切片振动切片3,4。这种准备产生表面损伤少和非常强大的光诱发反应的视网膜切片。在这里，我们的文件，此过程中如何可以根据红外光，以避免视觉色素漂白。
Protocol
1。准备电极准备记录和参比电极浸泡在1M氯化钠，并推动它们之间的15V〜20秒1 Hz的正弦波请使用微量拉马（萨特仪器的P – 97）的记录电极。对于补丁移液器使用硼硅玻璃1.2毫米外径和内径0.69毫米（萨特仪器，CAT＃B120 – 69 – 10）的一个。通过电极尖端测量串联电阻。根据靶细胞的大小选择枪头直径;胞体〜使用直径在20微米〜5MΩ胞体〜在使用直径5微米〜12MΩ。 准备地面/参比电?…
Discussion
片脊椎动物视网膜的录音已经几十年 1,2，已经相当成功，提供了一个如何视网膜电路编码入射光更深入的了解。振动切片，而不是直接用刀片切割的优点是视网膜切片，在表面产生较少的损害。具有吸吸管，这是容易消除这种损害健康细胞和目标，只是在表面之下，他们的连接保留在视网膜的电路，其中大部分的细胞类型已经确定了5,6，轻，显示强劲的反应。因此，从暗适应视?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
这项工作是支持由美国国立卫生研究院资助EY17606（APS）。
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Micropipette Puller | Sutter Instruments | P-97 | ||
| Borosilicate glass | Sutter Instruments | B120-69-10 | ||
| Polyethylene tubing | Intramedic | PE205 | ||
| Agar | Sigma | A7002 | ||
| Low gelling temp agarose | Sigma | A0701 | ||
| Ames’ Medium | Sigma | A1420 | ||
| Penicillin-Streptomycin | Sigma | P0781 |
References
- Weblin, F. Transmission along and between rods in the tiger salamander retina. J Physiol. 280, 449-470 (1978).
- Wu, S. M. Synaptic connections among retina neurons in living slices. J Neurosci Methods. 20, 139-149 (1987).
- Rieke, F. Temporal contrast adaptation in salamander bipolar cell. J Neurosci. 21, 9445-9454 (2001).
- Armstrong-Gold, C., &, R. i. e. k. e., F, . Bandpass filtering at the rod to second-order cell synapse in salamander (Ambystoma tigrinum) retina. J Neurosci. 23, 3796-3806 (2003).
- Masland, R. H. The fundamental plan of the retina. Nat Neurosci. 4, 877-886 (2001).
- Wassle, H. Parallel processing in the mammalian retina. Nat Rev Neurosci. 5, 747-757 (2004).
Tags
Patch Clamp RecordingsMouse Retinal NeuronsDark-adapted Slice PreparationVisual PigmentRetinal PhotoreceptorsIntracellular EventsCyclic-nucleotide-gated ChannelsMembrane PotentialNeurotransmitter ReleaseElectrophysiological RecordingsRetinal Slice PreparationsRazor BladeFilter PaperLow Gelling Temperature AgarVibrating MicrotomeSurface DamageLight-evoked ResponsesInfrared LightBleaching Visual Pigment
Cite This Article
Arman, A. C., Sampath, A. P. Patch Clamp Recordings from Mouse Retinal Neurons in a Dark-adapted Slice Preparation. J. Vis. Exp. (43), e2107, doi:10.3791/2107 (2010).