3D-kultur kjellermembrananalyse: Culturing kreftceller på 3D kjellermembran proteinmatrise for å studere celleinvasjon
Published: April 30, 2023
Abstract
Kilde: Cvetković, D., et al. Kvantifisering av brystkreftcelle invasivitet ved hjelp av en tredimensjonal (3D) modell. J. Vis. Uttr. (2014).
Denne videoen gir en detaljert metodikk for å vokse brystkreftceller i en 3D kjellermembranproteinmatrise, som eksemplifiserer potensialet til 3D-kultur i vurderingen av celleinvasjon i omgivelsene.
Protocol
1. Tredimensjonal kultur av brystkreftceller i kjellermembranmatrisen (innebyggingsteknikken) Håndtering av Matrigel kjellermembranmatrise: Tine på is over natten ved 4 °C. Kjellermembranmatrise er flytende ved lav temperatur, men størkner ved romtemperatur. Oppbevar membranmatrisen i kjelleren på is (Figur 1A-B). Dekk den konfokale no.1 glassbunnsfatet med 50 μl kjellermembranmatrise ved å spre matrisen ved hjelp av spissen av en P-200 Pipetman i et spiralmø…
Representative Results
Figur 1. Tredimensjonal kultur av MDA-MB-231 brystkreftceller i kjellermembranmatrise (innebyggingsteknikken). A-B) Et skjematisk av det eksperimentelle oppsettet (utført i avtrekkshetten). C) Brønnen på den glassbunnede retten belagt med 50 μl kjellermembranmatrise. D) Tallerken(er) plassert i en cellekulturinkubator (ved 37 °C med 5 % CO2) for å la matrisen størkne i minst 30 min. E) Celler ble prøvet. F) Celler…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Materials
| 35-mm glass-bottomed Confocal No.1 culture dishes | MatTek Corporation | P35G-1.0-14-C | Precooled before use |
| Bovine serum albumin (BSA) | BioShop | ALB003.100 | Used at 3% for IF |
| 1.5 ml tubes | VWR | CA10011-700 | CA10011-700 |
| 100-mm culture dish BD353003 | VWR | CABD353003 | Sterile, disposable |
| 15 ml Falcon tube | VWR | CA21008-918 | Sterile, disposable |
| 1 ml filtered tips | VWR | 10011-350 | Sterile, disposable |
| 200 μl filtered tips | VWR | 22234-016 | Sterile, disposable |
| 20 μl filtered tips | VWR | 22234-008 | Sterile, disposable |
| Fetal bovine serum (FBS) | Sigma | F1051 | Used at 10% (v/v) |
| RPMI 1640 Medium with Glutamine | Life Technologies | 11875-119 | Used for culturing of MDA-MB-231 cells |
| MEGM (bullet kit): MEBM (CC3151)+Single quots (CC4136) | Lonza | CC-3150 | Used for culturing of MCF10A cells |
| Olympus IX-81 microscope | Olympus | Used for 3D culture imaging (DIC images at 10X and 40X) |
Cite This Article
3D Culture Basement Membrane Assay: Culturing Cancer Cells on 3D Basement Membrane Protein Matrix to Study Cell Invasion. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20220, doi: (2023).