3D Kultur Basement Membrane Assay: Culturing kræftceller på 3D Kælder Membran Protein Matrix at studere Cell Invasion
Published: April 30, 2023
Abstract
Kilde: Cvetković, D., et al. Kvantificering af brystkræft celle invasivitet ved hjælp af en tre-dimensionel (3D) Model. J. Vis. Exp. (2014).
Denne video giver en detaljeret metode til at dyrke brystkræftceller i en 3D kælder membran protein matrix, eksemplificere potentialet i 3D-kultur i vurderingen af celleinvasion i det omgivende miljø.
Protocol
1. Tre-dimensionel kultur af brystkræftceller i Basement Membrane Matrix (Indlejringsteknikken) Håndtering matrigel kælder membran matrix: Tø på is natten over ved 4 °C. Kældermembranmatrix er flydende ved lav temperatur, men størkner ved stuetemperatur. Hold kælderen membran matrix på is(Figur 1A-B). Confocal No.1 glasbundsskålen dækkes med 50 μl kældermembranmatrix ved at sprede matrixen ved hjælp af spidsen af en P-200 Pipetman i et spiralmønster <…
Representative Results
Figur 1. Tredimensionel kultur af MDA-MB-231 brystkræftceller i kælderen membran matrix (indlejring teknik). A-B) En skematisk af den eksperimentelle opsætning (udført i røghætten). C) Brønden på den glasbundede skål belagt med 50 μl kældermembranmatrix. D) Skåle placeret i en cellekulturinkubator (ved 37 °C med 5% CO2) for at gøre det muligt for matrixen at størkne i mindst 30 min. E) Celler blev afprøvet…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Materials
| 35-mm glass-bottomed Confocal No.1 culture dishes | MatTek Corporation | P35G-1.0-14-C | Precooled before use |
| Bovine serum albumin (BSA) | BioShop | ALB003.100 | Used at 3% for IF |
| 1.5 ml tubes | VWR | CA10011-700 | CA10011-700 |
| 100-mm culture dish BD353003 | VWR | CABD353003 | Sterile, disposable |
| 15 ml Falcon tube | VWR | CA21008-918 | Sterile, disposable |
| 1 ml filtered tips | VWR | 10011-350 | Sterile, disposable |
| 200 μl filtered tips | VWR | 22234-016 | Sterile, disposable |
| 20 μl filtered tips | VWR | 22234-008 | Sterile, disposable |
| Fetal bovine serum (FBS) | Sigma | F1051 | Used at 10% (v/v) |
| RPMI 1640 Medium with Glutamine | Life Technologies | 11875-119 | Used for culturing of MDA-MB-231 cells |
| MEGM (bullet kit): MEBM (CC3151)+Single quots (CC4136) | Lonza | CC-3150 | Used for culturing of MCF10A cells |
| Olympus IX-81 microscope | Olympus | Used for 3D culture imaging (DIC images at 10X and 40X) |
Cite This Article
3D Culture Basement Membrane Assay: Culturing Cancer Cells on 3D Basement Membrane Protein Matrix to Study Cell Invasion. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20220, doi: (2023).