Doğrudan Etkileşim ile 3D Ortak Kültür: Etkileşimlerini İncelemek İçin Kanser Hücrelerini Monositlerle Birlikte Kültleme
Published: April 30, 2023
Abstract
Kaynak: Espinoza-Sánchez, vd. Hücre Dışı Matris Ekstresinde (ECME) Monositler ve Birincil Meme Kanseri Hücreleri Arasındaki İletişimi Analiz Etmek. (2018).
Bu video, meme kanseri hücrelerinin hücre dışı matris özü (ECME) tabanlı bir ortamda etkileşimlerini incelemek için monositlerle 3D ortak kültürünü açıklamaktadır. Bu yöntem kollajen bozulması, bağışıklık hücresi işe alımı ve hücre istilası gibi belirli özelliklerin incelenmesine yardımcı olur.
Protocol
1.3D doğrudan etkileşim ile ortak kültürler MRNA ve protein ekspresyonunun analizi için kültürden sonra her hücre soyunun bağımsız olarak sıralanabilmesi için brc hücrelerini ve monositleri hücre kültüründen önce farklı floresan boyalarla etiketle. Canlı hücrelerin hücre zarlarından serbestçe geçen ticari olarak mevcut coumarin ve rhodamine türevlerini kullanın. Etiketleme için genel bir protokol şunlardır: BrC hücrelerinin tek katmanlısını hazırlayı…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Materials
| U937 | American Type Culture Collection ATCC | CRL-1593.2 | Monocytic cell line/histiocytic lymphoma |
| THP-1 | American Type Culture Collection ATCC | TIB-202 | Monocytic cell line/acute monocytic leukemia |
| MCF-10A | American Type Culture Collection ATCC | CRL-10317 | Non-transformed breast cell line |
| MCF-7 | American Type Culture Collection ATCC | HTB-22 | Breast Cancer Cell line |
| MDA-MB-231 | American Type Culture Collection ATCC | HTB-26 | Breast Cancer Cell line |
| RPMI 1640 medium | GIBCO BRL Life Technologies | 11875-093 | |
| DMEM/F12 | GIBCO BRL Life Technologies | 11039-021 | |
| Antibiotic/Antimycotic | GIBCO BRL Life Technologies | 15240-062 | 100 U/mL penicillin, 100 µg/mL streptomycin, and 0.25 µg/mL Fungizone |
| Fetal Bovine Serum | GIBCO BRL Life Technologies | 16000-044 | |
| Horse serum | GIBCO BRL Life Technologies | 16050114 | |
| 0.05% Trypsin-EDTA 1X | GIBCO BRL Life Technologies | 25300-062 | |
| PBS 1X (Phosphate Buffered Saline | GIBCO BRL Life Technologies | 20012-027 | |
| Epidermal Growth Factor (EGF) | PeproTech | AF-100-15 (1.00mg) | |
| Insulin | SIGMA-ALDRICH | I1882-100MG | |
| Hydrocortisone | SIGMA-ALDRICH | H088-5G | |
| Cholera toxin Vibrio cholerae | SIGMA-ALDRICH | C8052-1MG | |
| Matrigel | Corning Inc | 356237 | Engelbreth-Holm-Swarm (EHS) mouse sarcoma, extracellular matrix extract, Store at -20°C until use at 4°C |
| Lab-Tek chamber slide with cover (8 well) | Nalge Nunc International | 177402 |
Cite This Article
3D Co-culture with Direct Interaction: Co-culturing Cancer Cells with Monocytes to Study Their Interaction. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20216, doi: (2023).