3D שיתוף תרבות עם אינטראקציה ישירה: שיתוף culturing תאים סרטניים עם מונוציטים ללמוד את האינטראקציה שלהם

Published: April 30, 2023

Abstract

מקור: אספינוזה-סאנצ’ס, ואח ‘. ניתוח התקשורת בין מונוציטים ותאי סרטן שד ראשוניים בתמצית מטריקס חוץ-תאית (ECME) מבוססת מערכת תלת מימדית. (2018).

וידאו זה מתאר את התרבות המשותפת 3D של תאים סרטניים בשד עם מונוציטים ללמוד את האינטראקציה שלהם בסביבה מבוססת תמצית מטריצה חוץ תאית (ECME). שיטה זו מסייעת בחקר תכונות ספציפיות כגון השפלת קולגן, גיוס תאים חיסוניים ופלישה לתאים.

Protocol

1.3D תרבויות משותפות עם אינטראקציה ישירה תווית תאי BrC ומונוציטים עם צבעים פלואורסצנטיים שונים לפני תרבות התא כדי לאפשר מיון עצמאי של כל שושלת תאים לאחר תרבות לניתוח של mRNA וביטוי חלבון. השתמש נגזרות זמינות מסחרית של קומרין ורודמין כי בחופשיות לעבור דרך קרום התא של תאים חיים. פר…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Materials

U937 American Type Culture Collection ATCC CRL-1593.2 Monocytic cell line/histiocytic lymphoma
THP-1 American Type Culture Collection ATCC TIB-202 Monocytic cell line/acute monocytic leukemia
MCF-10A American Type Culture Collection ATCC CRL-10317 Non-transformed breast cell line
MCF-7 American Type Culture Collection ATCC HTB-22 Breast Cancer Cell line
MDA-MB-231 American Type Culture Collection ATCC HTB-26 Breast Cancer Cell line
RPMI 1640 medium GIBCO BRL Life Technologies 11875-093
DMEM/F12 GIBCO BRL Life Technologies 11039-021
Antibiotic/Antimycotic GIBCO BRL Life Technologies 15240-062 100 U/mL penicillin, 100 µg/mL streptomycin, and 0.25 µg/mL Fungizone
Fetal Bovine Serum GIBCO BRL Life Technologies 16000-044
Horse serum GIBCO BRL Life Technologies 16050114
0.05% Trypsin-EDTA 1X GIBCO BRL Life Technologies 25300-062
PBS 1X (Phosphate Buffered Saline GIBCO BRL Life Technologies 20012-027
Epidermal Growth Factor (EGF) PeproTech AF-100-15 (1.00mg)
Insulin SIGMA-ALDRICH I1882-100MG
Hydrocortisone SIGMA-ALDRICH H088-5G
Cholera toxin Vibrio cholerae SIGMA-ALDRICH C8052-1MG
Matrigel Corning Inc 356237 Engelbreth-Holm-Swarm (EHS) mouse sarcoma, extracellular matrix extract, Store at -20°C until use at 4°C
Lab-Tek chamber slide with cover (8 well) Nalge Nunc International 177402

Play Video

Cite This Article
3D Co-culture with Direct Interaction: Co-culturing Cancer Cells with Monocytes to Study Their Interaction. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20216, doi: (2023).

View Video