Montaggio Agar: un metodo di base per il montaggio di embrioni zebrafish vivi per l'imaging a lungo termine
Published: April 30, 2023
Abstract
Fonte: Hagedorn E. J., et al. Generazione di embrioni di zebrafish parabiotici mediante fusione chirurgica di blastulae in via di sviluppo. J. Vis. Exp. (2016).
Questo video descrive le istruzioni passo dopo passo sul montaggio di embrioni di zebrafish vivi su 6 piastre di pozzo utilizzando agarosio a bassa fusione. Fornisce anche il processo per acquisire immagini di embrioni vivi e analizzarli utilizzando il software.
Protocol
1. Configurazione del microscopio, acquisizione, elaborazione e analisi delle immagini Preparare l’agarosio a basso punto di fusione (LMP) dello 0,8%: Aggiungere 0,8 g di agarosio LMP a 100 ml E3 e riscaldare fino a completo scioglimento. Mentre è caldo, aliquota 1 ml di agarosio LMP in tubi di microfugo da 1,5 ml in un blocco riscaldante a 37 °C. L’agarosio LMP rimarrà fuso a 37 °C. Aggiungere 40 μl di 4 mg/ml (25x), pH 7,0 tricaina a ciascuna aliquota di 1 ml di agarosio LMP a 37 °C.<s…
Materials
| LMP agarose (Ultrapure LMP agarose) | Invitrogen | 16520100 |
| Tricaine (powder) (Tricaine Methanesulfonato, Tricaine-S) | Western Chemical Inc | MS 222 |
| Glass-bottom 6-well plates used for imaging | MatTek | P06G1.5-20-F |
| 10 ml pipette pump (green) (Pipette Pump Pipettor) | Novatech International | F37898-0000 |
Cite This Article
Agar Mounting: A Basic Method of Mounting Live Zebrafish Embryos for Long-Term Imaging. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20187, doi: (2023).