Enzymatic Sindirim ve Manuel Ayrışma: C. elegans Embriyolarını Hücre Kültürüne Hazırlama Yöntemi
Published: April 30, 2023
Abstract
Kaynak: Sangaletti, R. ve Bianchi, L. Embriyonik C. elegans Hücrelerini Kültleme Yöntemi. J. Vis. Exp. (2013).
Bu video, embriyonik C. elegans hücrelerini in vitro olarak izole etmek ve steril olarak kültüre etmek için bir yöntem tanıtır.
Protocol
1. Embriyonik Hücrelerin Ayrışması İşlemin sonraki adımlarını steril koşullar altında laminer akış davlumbaz kullanarak uygulayın. Hayvanlar bakteri plakalarında önlük iken, yıkamalar ve çamaşır suyu içeren lizis çözeltisi ile tedavi, tüm bakteriler olmasa bile en çok ortadan kaldırmalıdır. Böylece prosedürün bu noktasında laminar davlumbaz kullanmak yumurta süspansiyonunun yeni kirlenmesini önler. Peletlenmiş yumurtaları 1 ml 2 mg/ml chitinase (yu…
Representative Results
Şekil 1. C. elegans embriyolarını kitin tedavisinden önce ve sonra. (A) Kitine maruz kalmadan önce yumurtaların fotoğrafı. Ok, bir embriyoyu çevreleyen şeffaf ve bozulmamış yumurta kabuğuna işaret eder. (B) Yumurtalar 10 dakika boyunca chitinase ile muamele edilir. Yumurta kabukları sindirilmiştir ve artık embriyoların etraf?…
Materials
| REAGENTS | ||
| Leibovitz's L-15 Medium (1x) Liquid | Invitrogen | 11415-064 |
| Fetal Bovine Serum | Invitrogen | 16140-063 |
| Penicillin-streptomycin | Sigma | P4333-100ML |
| Chitinase from Streptomyces Griseus | Sigma | C6137-25UN |
| Peanut Lectin | Sigma | L0881-10MG |
| EQUIPMENT | ||
| 101-1000 μl Blue Graduated Pipet Tips | USA Scentific | 1111-2821 |
| 10 ml Sterilized Pipet Individually Wrapped | USA Scentific | 1071-0810 |
| Ergonomic Variable Volume (100-1000 μl) Pipettor with tip ejector | VWR International Inc. | 89079-974 |
| Portable Pipet Aid, Drummond | VWR International Inc. | 53498-103 |
| Transfer Plastic Pipet Sterile | VWR International Inc. | 14670-114 |
| 15 ml Conical Tube | USA Scentific | 1475-1611 |
| Sterile 18 gauge Needles | Becton, Dickinson and Co. | 305196 |
| Sterile 10 ml Syringes | Becton, Dickinson and Co. | 305482 |
| Plastic Syringe Filters Corning 0,20 μm pore size | Corning | 431224 |
| Acrodic 25 mm Syringe filter w/5 μm versapor Membrane | VWR International Inc. | 28144-095 |
| 60×15 mm Petri Dish Sterile | VWR International Inc. | 82050-548 |
| 100×15 mm Petri Dish Sterile | VWR International Inc. | 82050-912 |
| 12 mm Diameter Glass Coverslips | VWR International Inc. | 48300-560 |
| Clear Cell Culture Plates 24 Well Flat Bottom w/lid | Thomas scientific | 6902A09 |
| Dumont #5- Fine Forceps | Fine Science Tools | 11254-20 |
| Centrifuge 5702 | Eppendorf | 22629883 |
| Laminar Flow Hood | ||
| Inverted Microscope with x10 objective | ||
| Ambient air humidified Incubator |
Cite This Article
Enzymatic Digestion and Manual Dissociation: A Method to Prepare C. elegans Embryos for Cell Culture. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20159, doi: (2023).