Enzymatische Verdauung und manuelle Dissoziation: Eine Methode zur Vorbereitung von C. elegans Embryonen auf die Zellkultur
Published: April 30, 2023
Abstract
Quelle: Sangaletti, R. und Bianchi, L. A Method for Culturing Embryonic C. elegans Cells. J. Vis. (2013).
Dieses Video stellt eine Methode vor, um embryonale C. elegans-Zellen in vitro zu isolieren und steril zu kulturisieren.
Protocol
1. Embryonale Zelldissoziation Führen Sie die nächsten Schritte des Verfahrens unter sterilen Bedingungen mit einer laminaren Durchflusshaube durch. Während Tiere auf Bakterienplatten gekleidet sind, sollten die Wässer und die Behandlung mit der Lyselösung, die Bleichmittel enthält, die meisten, wenn nicht alle Bakterien eliminieren. So verhindert die Verwendung einer laminaren Haube an dieser Stelle des Verfahrens eine erneute Kontamination der Eisuspension. Pelleteier in 1 ml …
Representative Results
Abbildung 1. C. elegans Embryonen vor und nach der Chitinase-Behandlung. (A) Foto von Eiern vor der Chitinase. Der Pfeil zeigt auf die transparente und intakte Eierschale, die einen Embryo umgibt. (B) Eier, die 10 min lang mit Chitinase behandelt wurden. Die Eierschalen sind verdaut und sind um die Embryonen herum nicht mehr sichtbar. Die Pfei…
Materials
| REAGENTS | ||
| Leibovitz's L-15 Medium (1x) Liquid | Invitrogen | 11415-064 |
| Fetal Bovine Serum | Invitrogen | 16140-063 |
| Penicillin-streptomycin | Sigma | P4333-100ML |
| Chitinase from Streptomyces Griseus | Sigma | C6137-25UN |
| Peanut Lectin | Sigma | L0881-10MG |
| EQUIPMENT | ||
| 101-1000 μl Blue Graduated Pipet Tips | USA Scentific | 1111-2821 |
| 10 ml Sterilized Pipet Individually Wrapped | USA Scentific | 1071-0810 |
| Ergonomic Variable Volume (100-1000 μl) Pipettor with tip ejector | VWR International Inc. | 89079-974 |
| Portable Pipet Aid, Drummond | VWR International Inc. | 53498-103 |
| Transfer Plastic Pipet Sterile | VWR International Inc. | 14670-114 |
| 15 ml Conical Tube | USA Scentific | 1475-1611 |
| Sterile 18 gauge Needles | Becton, Dickinson and Co. | 305196 |
| Sterile 10 ml Syringes | Becton, Dickinson and Co. | 305482 |
| Plastic Syringe Filters Corning 0,20 μm pore size | Corning | 431224 |
| Acrodic 25 mm Syringe filter w/5 μm versapor Membrane | VWR International Inc. | 28144-095 |
| 60×15 mm Petri Dish Sterile | VWR International Inc. | 82050-548 |
| 100×15 mm Petri Dish Sterile | VWR International Inc. | 82050-912 |
| 12 mm Diameter Glass Coverslips | VWR International Inc. | 48300-560 |
| Clear Cell Culture Plates 24 Well Flat Bottom w/lid | Thomas scientific | 6902A09 |
| Dumont #5- Fine Forceps | Fine Science Tools | 11254-20 |
| Centrifuge 5702 | Eppendorf | 22629883 |
| Laminar Flow Hood | ||
| Inverted Microscope with x10 objective | ||
| Ambient air humidified Incubator |
Cite This Article
Enzymatic Digestion and Manual Dissociation: A Method to Prepare C. elegans Embryos for Cell Culture. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20159, doi: (2023).