Это видео описывает в виво кальция изображений в дрогофила нейронов с помощью GCaMP. Рекомендуемые протокол клип показывает, как записывать изменения в GCaMP флуоресценции от нейронов грибного тела во время обонятельного кондиционирования эксперимента.
Protocol
Этот протокол является выдержкой из Хэнкок и др., In Vivo оптических кальция изображений обучения индуцированной синаптической пластичности в Drosophila меланогастер, J. Vis. Exp. (2019). 1. Виво кальция изображений Используйте мультифотонный микроскоп, оснащенный ?…
Materials
1-Octen-3-ol
Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA
O5284
Chemical used as odorant
3-Octanol
Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA
218405
Chemical used as odorant
4-Methylcyclohexanol
Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA
153095
Chemical used as odorant
Bandpass filter for EGFP (525/50 nm)
Carl Zeiss Microscopy GmbH, Jena, Germany
Mineral oil
Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA
M8410
Used as diluent for odorants
Mode-locked Ti-Sapphire laser Chameleon Vision 2
Coherent Inc., Santa Clara, CA, USA
Tunable infrared femtosecond laser
Multiphoton Microscope LSM 7MP equipped with BiG detectors
Carl Zeiss Microscopy GmbH, Jena, Germany
Multiphoton microscope, multiple companies provide similar devices.
Plan-Apochromat 20x (NA = 1.0) water immersion objective
Carl Zeiss Microscopy GmbH, Jena, Germany
421452-9900-000
Objective W "Plan-Apochromat" 20x/1.0 DIC M27 70mm
Visual Basics of Applicatons (VBA) software to receive a trigger from the odor-delivery device and the electric shock application device (power supply) to interact with the ZEN software from Zeiss that controls the microscope