Drosophila In Vivo Imagem de cálcio: um método para imagem funcional da atividade neuronal
Published: April 30, 2023
Abstract
Fonte: Hancock, C. E., et al. In Vivo Optical Calcium Imaging of Learning-Induced Synaptic Plasticity induced em Drosophila melanogaster. J. Vis. Exp. (2019).
Este vídeo descreve imagens in vivo de cálcio em neurônios Drosophila usando GCaMP. O clipe de protocolo em destaque mostra como registrar alterações na fluorescência GCaMP de neurônios corporais de cogumelos durante um experimento de condicionamento olfativo.
Protocol
Este protocolo é um trecho de Hancock et al., In Vivo Optical Calcium Imaging of Learning-Induced Synaptic Plasticity induced em Drosophila melanogaster, J. Vis. Exp. (2019). 1. Imagem de cálcio in vivo Use um microscópio multifotográfico equipado com um laser infravermelho e um objetivo de imersão em água (ver Tabela de Materiais),instalado em uma mesa isolada de vibração. Para a visualização de indicadores de cálcio baseados e…
Materials
| 1-Octen-3-ol | Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA | O5284 | Chemical used as odorant |
| 3-Octanol | Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA | 218405 | Chemical used as odorant |
| 4-Methylcyclohexanol | Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA | 153095 | Chemical used as odorant |
| Bandpass filter for EGFP (525/50 nm) | Carl Zeiss Microscopy GmbH, Jena, Germany | ||
| Mineral oil | Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA | M8410 | Used as diluent for odorants |
| Mode-locked Ti-Sapphire laser Chameleon Vision 2 | Coherent Inc., Santa Clara, CA, USA | Tunable infrared femtosecond laser | |
| Multiphoton Microscope LSM 7MP equipped with BiG detectors | Carl Zeiss Microscopy GmbH, Jena, Germany | Multiphoton microscope, multiple companies provide similar devices. | |
| Plan-Apochromat 20x (NA = 1.0) water immersion objective | Carl Zeiss Microscopy GmbH, Jena, Germany | 421452-9900-000 | Objective W "Plan-Apochromat" 20x/1.0 DIC M27 70mm |
| Visual Basics of Applicatons (VBA) software to receive a trigger from the odor-delivery device and the electric shock application device (power supply) to interact with the ZEN software from Zeiss that controls the microscope | Custom-written and available upon request | n.a. | n.a. |
Cite This Article
Drosophila In Vivo Calcium Imaging: A Method for Functional Imaging of Neuronal Activity. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20129, doi: (2023).