Drosophila In Vivo Imaging calcio: un metodo per l'imaging funzionale dell'attività neuronale
Published: April 30, 2023
Abstract
Fonte: Hancock, C. E., et al. J. Vis. Exp. (2019).
Questo video descrive l’imaging in vivo del calcio nei neuroni Drosophila usando GCaMP. La clip del protocollo in primo piano mostra come registrare i cambiamenti nella fluorescenza GCaMP dai neuroni del corpo dei funghi durante un esperimento di condizionamento olfattivo.
Protocol
Questo protocollo è un estratto da Hancock et al., In Vivo Optical Calcium Imaging of Learning-Induced Synaptic Plasticity in Drosophila melanogaster, J. Vis. Exp. (2019). 1. Imaging in vivo di calcio Utilizzare un microscopio multifotono dotato di un laser a infrarossi e di un obiettivo di immersione in acqua (vedi Tabella dei materiali), installato su un tavolo isolato dalle vibrazioni. Per la visualizzazione di indicatori di calcio bas…
Materials
| 1-Octen-3-ol | Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA | O5284 | Chemical used as odorant |
| 3-Octanol | Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA | 218405 | Chemical used as odorant |
| 4-Methylcyclohexanol | Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA | 153095 | Chemical used as odorant |
| Bandpass filter for EGFP (525/50 nm) | Carl Zeiss Microscopy GmbH, Jena, Germany | ||
| Mineral oil | Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA | M8410 | Used as diluent for odorants |
| Mode-locked Ti-Sapphire laser Chameleon Vision 2 | Coherent Inc., Santa Clara, CA, USA | Tunable infrared femtosecond laser | |
| Multiphoton Microscope LSM 7MP equipped with BiG detectors | Carl Zeiss Microscopy GmbH, Jena, Germany | Multiphoton microscope, multiple companies provide similar devices. | |
| Plan-Apochromat 20x (NA = 1.0) water immersion objective | Carl Zeiss Microscopy GmbH, Jena, Germany | 421452-9900-000 | Objective W "Plan-Apochromat" 20x/1.0 DIC M27 70mm |
| Visual Basics of Applicatons (VBA) software to receive a trigger from the odor-delivery device and the electric shock application device (power supply) to interact with the ZEN software from Zeiss that controls the microscope | Custom-written and available upon request | n.a. | n.a. |
Cite This Article
Drosophila In Vivo Calcium Imaging: A Method for Functional Imaging of Neuronal Activity. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20129, doi: (2023).