דרוזופילה (לא כולל) כימות צומת נוירומוסקולרי (NMJ): שיטה להערכת מורפולוגיה ותפקוד סינפטיים
Published: April 30, 2023
Abstract
מקור: Castells-Nobau, A., ואח ‘. שני אלגוריתמים עבור תפוקה גבוהה וכימות רב פרמטרי של מורפולוגיה צומת Neuromuscular Drosophila . ג’יי ויס אקספ. (2017).
הצומת הנוירומוסקולרי דרוזופילה (NMJ) משמש כמודל לחקר המורפולוגיה והתפקוד של הסינפסות. סרטון זה מתאר תכונות חשובות שהחוקרים מכמתים כדי לאפיין את ה- NMJ. פרוטוקול הדוגמה מדגים תוכנה המסוגלת לבצע את הכימות באופן אוטומטי.
Protocol
פרוטוקול זה הוא קטע מתוך Castells-Nobau ואח ‘,שני אלגוריתמים עבור תפוקה גבוהה וכימות רב פרמטרי של Drosophila Nיורומוסקולרי צומת מורפולוגיה, J. Vis. Exp. (2017). 1. דרישות לפני עיבוד תמונה בצע את ההכנות לספר פתוח של Drosophila של זחלים נודדים כוכב שלישי (L3), כפי שתואר קודם לכן.</l…
Representative Results
איור 1: דוגמאות לתוצאות לא הולמות של פילוח מאקרו. תוצאות תמונות לאחר הפעלת “Drosophila NMJ מורפומטריה” או “Drosophila NMJ בוטון מורפומטריה”. חלקים של המסוף הסינפטי אינם כלולים בחלוקה לרמותהצהובה( A ). חלקים מהרקע כלולים במסוף הסינפ?…
Materials
| Immunostaining | Dilution | ||
| Mouse anti-discs large 1 | Developmental Studies Hybridoma Bank | AFFN-DLG1-4D6 | 1/25 (conjungated using the Zenon Alexa Fluor 528 Labeling Kit) |
| Rabbit anti-horseradish peroxidase | Jackson IR | 323-005-021 | 1/500 |
| Rabbit anti-Synaptotagmin | Gift from Hugo Bellen | Jan-00 | |
| Mouse anti-Cysteine string protein | Developmental Studies Hybridoma Bank | DCSP-1(ab49) | 1/10 (conjungated using the Zenon Alexa Fluor 528 Labeling Kit) |
| Mouse anti-Bruchpilot | Developmental Studies Hybridoma Bank | nc82 | Jan-50 |
| Goat anti-mouse Alexa Fluor 488 | Life technologies | A11029 | 1/200 |
| Goat anti-rabbit Alexa Fluor 568 | Life technologies | A11011 | 1/500 |
| Zenon Alexa Fluor 568 Mouse IgG1 Labeling Kit | ThermoFisher | Z25006 | |
| ProLong Gold Antifade Mountant | ThermoFisher | P36930 | |
| Equipment | |||
| Confocal microscope or fluorescence microscope | Leica SP5 | ||
| Zeiss Axio imager | |||
| Computer | Mac or Pc | ||
| Software | |||
| FIJI |
Cite This Article
Drosophila Neuromuscular Junction (NMJ) Quantification: A Method to Assess Synaptic Morphology and Function. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20107, doi: (2023).