Drosophila ( Drosophila ) Quantification de la jonction neuromusculaire (NMJ) : une méthode pour évaluer la morphologie et la fonction synaptiques
Published: April 30, 2023
Abstract
Source : Castells-Nobau, A., et autres deux algorithmes pour la quantification à haut débit et multi-paramétrique de la morphologie neuromusculaire de jonction de Drosophila. J. Vis. Exp. (2017).
La jonction neuromusculaire de Drosophila (NMJ) est employée comme modèle pour étudier la morphologie et la fonction des synapses. Cette vidéo décrit les caractéristiques importantes que les chercheurs quantifient pour caractériser le NMJ. Le protocole d’exemple montre un logiciel capable d’effectuer la quantification automatiquement.
Protocol
Ce protocole est un extrait de Castells-Nobau et coll., Two Algorithms for High-throughput and Multi-parametric Quantification of Drosophila Neuromuscular Junction Morphology, J. Vis. Exp. (2017). 1. Exigences avant le traitement de l’image Effectuez des préparations de livres ouverts Drosophila de larves errantes de troisième stade (L3), comme décrit précédemment. Co-immunolabel Drosophila NMJ terminaux à l’aide d’u…
Representative Results
Figure 1 : Exemples de résultats de segmentation macro inappropriés. Résultat des images après avoir couru “Drosophila NMJ Morphometrics ” ou “Drosophila NMJ Bouton Morphometrics « . Certaines parties du terminal synaptique ne sont pas incluses dans le contour jaune (A). Certaines parties de l’arrière-plan sont incluses dans le terminal synaptique par le contour jaune (B…
Materials
| Immunostaining | Dilution | ||
| Mouse anti-discs large 1 | Developmental Studies Hybridoma Bank | AFFN-DLG1-4D6 | 1/25 (conjungated using the Zenon Alexa Fluor 528 Labeling Kit) |
| Rabbit anti-horseradish peroxidase | Jackson IR | 323-005-021 | 1/500 |
| Rabbit anti-Synaptotagmin | Gift from Hugo Bellen | Jan-00 | |
| Mouse anti-Cysteine string protein | Developmental Studies Hybridoma Bank | DCSP-1(ab49) | 1/10 (conjungated using the Zenon Alexa Fluor 528 Labeling Kit) |
| Mouse anti-Bruchpilot | Developmental Studies Hybridoma Bank | nc82 | Jan-50 |
| Goat anti-mouse Alexa Fluor 488 | Life technologies | A11029 | 1/200 |
| Goat anti-rabbit Alexa Fluor 568 | Life technologies | A11011 | 1/500 |
| Zenon Alexa Fluor 568 Mouse IgG1 Labeling Kit | ThermoFisher | Z25006 | |
| ProLong Gold Antifade Mountant | ThermoFisher | P36930 | |
| Equipment | |||
| Confocal microscope or fluorescence microscope | Leica SP5 | ||
| Zeiss Axio imager | |||
| Computer | Mac or Pc | ||
| Software | |||
| FIJI |
Cite This Article
Drosophila Neuromuscular Junction (NMJ) Quantification: A Method to Assess Synaptic Morphology and Function. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20107, doi: (2023).