الفخاخ خارج الخلية العدلات : كيفية إنشاء وتصور لهم
Summary
الفخاخ خارج الخلية العدلات (شبكات) هي آلية هامة لمكافحة المناعة الفطرية المسببة للأمراض البكتيريا والفطريات والطفيليات. نحن هنا وصف الأساليب المحببة لعزل العدلة من دم الإنسان وتفعيلها على شكل الشباك. نقدم تقنيات إعداد تصور المستجدة في ضوء الفحص المجهري والإلكترون.
Abstract
العدلة المحببة هي المجموعة الأكثر وفرة من الكريات البيض في الدم المحيطي. كما البالعات المهنية ، فإنها تبتلع البكتيريا وقتلهم عندما intracellularly فتيل هذه الميكروبات مع حبيبات يبلوع. وجدنا أن العدلات وسيلة إضافية لقتل الكائنات الحية الدقيقة : عند التنشيط ، التي يطلقون البروتينات الحبيبية والتي تشكل معا لونين ألياف خارج الخلية التي تربط مسببات الأمراض. هذه الهياكل رواية ، أو الفخاخ خارج الخلية العدلات (شبكات) ، تتحلل عوامل الفوعة وقتل البكتيريا 1 ، 2 الفطريات والطفيليات 3. العمود الفقري الهيكلية المستجدة هو الحمض النووي ، وأنها تتدهور بسرعة في وجود DNases. وهكذا ، معربا عن DNases البكتيريا هي أكثر خبثا 4. باستخدام المجهر مترابط يجمع TEM ، SEM ، المناعي والعيش تقنيات التصوير الخلية ، ويمكن أن نعرض على التحفيز ، ونوى العدلات تفقد شكلها والتجانس في الاتحاد الأوروبي والمغاير. في وقت لاحق ، المغلف النووية والأغشية الحبيبية تتفكك السماح للخلط مكونات NET. أخيرا ، يتم الإفراج عن المستجدة كما في فواصل غشاء الخلية. هذا البرنامج موت الخلية (NETosis) يختلف عن موت الخلايا المبرمج والنخر ، وتعتمد على توليد أنواع الاكسجين التفاعلية التي NADPH أوكسيديز 5.
الفخاخ خارج الخلية العدلات وفيرة في مواقع الالتهاب الحاد. المستجدة ويبدو أن شكلا من أشكال الاستجابة المناعية الفطرية التي تربط الكائنات الحية الدقيقة ، ومنعهم من الانتشار ، وضمان وجود تركيز عال المحلية العوامل المضادة للميكروبات أن تتحلل عوامل الفوعة وقتل مسببات الأمراض وبالتالي السماح للوفاء العدلات المضادة للجراثيم وظيفتها حتى بعد فترة حياتها. هناك أدلة متزايدة ، ومع ذلك ، وتشارك أيضا في الأمراض المستجدة التي تتراوح من المناعة الذاتية متلازمات 6 إلى العقم.
نحن تصف الأساليب المحببة لعزل العدلات المحيطية 7 من الدم البشري وتحفيز لهم لتشكيل الشباك. كما أننا تشمل بروتوكولات لتصور المستجدة في ضوء الفحص المجهري والإلكترون.
Protocol
Discussion
وسوف يسمح البروتوكول شريطة عدم عزل العدلات حفز على نقاء كبير ، وتحريض تشكيل NET ، وتحليل التغيرات المورفولوجية خلال NETosis. عند التعامل مع العينات بعناية ، وتجنب أي ظروف قاسية الغسيل ، مما سيؤدي إلى فقدان أكثر من شبكات فضفاضة يعلق ، يمكن مقارنة كمية تشكيل NET في ظل ظروف مختلفة التحفيز (المدة ، والتحفيز). في هذا الصدد ، يمكن للبروتوكولات المنصوص بمثابة نقطة انطلاق لإنشاء طرق لتحليل سيناريوهات أكثر تعقيدا : التفاعلات العدلة / الممرض ، وتسلسل من المحفزات ، تتفاعل مع الخلايا المناعية الأخرى.
References
- Brinkmann, V. Neutrophil extracellular traps kill bacteria. Science. 303, 1532-1535 .
- Urban, C. F., Reichard, U., Brinkmann, V., Zychlinsky, A. Neutrophil extracellular traps capture and kill Candida albicans yeast and hyphal forms. Cell Microbiol. 8, 668-676 (2006).
- M, E. Leishmania amazonensis promastigotes induce and are killed by neutrophil extracellular traps. PNAS. 106, 6748-6753 (2009).
- Buchanan, J. T., Simpson, A. J., Aziz, R. K., Liu, G. Y., Kristian, S. A., Kotb, M., Feramisco, J., Nizet, V. DNase expression allows the pathogen group A Streptococcus to escape killing in neutrophil extracellular traps. Curr Biol. 14, 396-400 (2006).
- Fuchs, T. A. Novel cell death program leads to neutrophil extracellular traps. J Cell Biol. 176, 231-241 (2007).
- Brinkmann, V., Zychlinsky, A. Beneficial suicide: why neutrophils die to make NETs. Nat Rev Microbiol. 5, 577-582 (2007).
- Aga, E., Katschinski, D. M., van Zandbergen, G., Laufs, H., Hansen, B., Muller, K., Solbach, W., Laskay, T. Inhibition of the spontaneous apoptosis of neutrophil granulocytes by the intracellular parasite Leishmania major. J Immunol. , 169-898 (2002).
