ऐतिहासिक और क्रेफ़िश सलामी बल्लेबाज स्नायु के NMJ में फिजियोलॉजी प्रदर्शन देखें

परिचय क्रसटेशियन के neuromuscular जंक्शनों शरीर क्रिया विज्ञान के लिए और विशेष रूप से पिछले कुछ वर्षों में synaptic फिजियोलॉजी महत्वपूर्ण योगदान प्रदान की है. विच्छेदन और व्यवहार्यता में आसानी शायद महत्वपूर्ण कारक है कि जल्दी anatomist और बाद में प्रयोगात्मक तैयारी के रूप में क्रसटेशियन उपयोग physiologist पदोन्नत कर रहे हैं. विशेष रूप से क्रेफ़िश आसानी से सबसे मीठे पानी नदियों और झीलों के रूप में अच्छी तरह के रूप में वे के रूप में एक ठंडा, नमक पानी के वातावरण की आवश्यकता होती है क्रसटेशियन की तुलना में एक प्रयोगशाला स्थापित करने में बनाए रखने के लिए आसान कर रहे हैं से प्राप्य हैं. वापस देर से 1800 में एक जीव विज्ञानी विशेष जलीय प्रजातियों (यानी, crayfishes) दिल ले लिया और एक हकदार पुस्तक लिखी क्रेफ़िश (गु हक्सले, 1879) . यह पाठ इन जीवों पर साल के लिए गाइड बुक के रूप में सेवा की और आज भी चुनिंदा crayfishes जीवन, इतिहास, शारीरिक रचना और फिजियोलॉजी के साथ निपटने पर एक व्यापक पुस्तक के रूप में स्वागत है. हक्सले एक मॉडल जानवर के रूप में क्रेफ़िश देखी गयी सभी पहलुओं में प्राणीशास्त्र की गहराई में गोता लगाने, इस प्रकार, अपनी पुस्तक की व्यापक प्रकृति. समय फायदेमंद था के रूप में शरीर विज्ञान मेंढक दिल तैयारी (घंटी, 1882a, ख) को बनाए रखने के लिए आवश्यक आयनों की घंटी समझ के साथ देर से 1880 में खिल गया था. यह संभावना एक कारण है कि अन्य प्रजातियों में शारीरिक प्रयोगों क्रेफ़िश के रूप में जल्दी के रूप में अच्छी प्रगति है. इसके अलावा, एक crustacean तैयारी बनाए रखने खारा 1936 में किया गया था वैन Harreveld द्वारा वर्णित है. हैरानी की बात है क्रेफ़िश पैरों में सलामी बल्लेबाज की मांसपेशी के innervation भी इतिहास में इस समय (Biedermann, 1887) के आसपास विशेषता जा रहा था. लेकिन इससे भी ज्यादा आश्चर्य की बात है कि शारीरिक अध्ययन पहले से ही फ्रांस में चार्ल्स Richet द्वारा क्रेफ़िश की मांसपेशियों में चल रहे थे. वास्तव में, क्रेफ़िश प्रयोगों में संभवतः (NMJ) neuromuscular (; भी Richet, 1881 देखें Richet, 1879) में सरलीकरण पहले प्रदर्शित हो सकता है. अगले कुछ दशकों में क्रेफ़िश NMJs तनाव विकास और शरीर रचना विज्ञान (वान Harreveld और Wiersma, 1936) के लिए सम्मान किया जा रहा थे anatomically और physiologically बताया. intracellular रिकॉर्डिंग के तेज इलेक्ट्रोड (लिंग और जेरार्ड, 1949), क्षेत्र को पुनर्जीवित प्रश्नों के विभिन्न सेट से निपटने के साथ, आगमन. Crustacean मांसपेशियों वर्गीकृत संकुचन का उत्पादन (; Katz, 1949, Katz और Kuffler 1946 Wiersma, 1949) के लिए जाने जाते थे, लेकिन यह 1953 तक कि Fatt और Katz केकड़ा मांसपेशी फाइबर में अल्पावधि सुविधा transmembrane क्षमता दर्ज नहीं था. सलामी बल्लेबाज क्रेफ़िश के अंगों में मांसपेशियों को फिर से 1961 में डाला गया था जब Dudel और Kuffler इस मांसपेशी में सरलीकरण प्रदर्शन किया और 1 सेंट समय के लिए दिखाया presynaptic निषेध की घटना (1961a, ख, Dudel, 1963, 1965a ). वे भी इस NMJ (1961b) में synaptic प्रसारण के quantal प्रकृति पर सूचना दी. पिछले 50 वर्षों में ध्यान की काफी एक सा तैयार करने और विभिन्न synaptic फिजियोलॉजी की निगरानी तकनीक का इस्तेमाल करने के लिए दिया गया है. इस तैयारी का उपयोग कर जांच के दृश्य पर एक संक्षिप्त के लिए, हम ध्यान देने योग्य बात है कि पूरे मांसपेशी एक उत्तेजक और एक निरोधात्मक अक्षतंतु जो चुनिंदा प्रेरित किया जा सकता द्वारा innervated है के साथ शुरू करते हैं. एटवुड (1964) उत्तेजना की गाड़ियों सुविधा उत्तेजक postsynaptic क्षमता और उत्पादन मांसपेशियों में तनाव के साथ प्रदर्शन किया. Iravani (1965) synaptic प्रतिक्रियाओं में क्षेत्रीय मतभेद पेशी के क्षेत्र पर निर्भर करता है पर रिपोर्ट. उसके तुरंत बाद Dudel (1965a, ख) खोलने पर तंत्रिका टर्मिनलों के साथ क्षमता दर्ज और दिखा दिया कि बढ़ती द्वारा neuromodulator सेरोटोनिन बढ़ाया synaptic प्रसारण quantal सामग्री मतलब. यह इस समय तक स्थापित किया गया था कि crustacean मांसपेशियों ग्लूटामेट और विभिन्न अमीनो एसिड के रूप में के रूप में अच्छी तरह से GABA जवाब (वान Harreveld और Mendelson, 1959; रॉबिंस, 1959, Kerkut एट अल, 1965). GABA की निरोधात्मक प्रतिक्रियाओं फ्लोरे (Bazemore एट अल, 1956, 1957) और दूसरों (Boistel और Fatt, 1958) द्वारा की पहचान की थी. GABA बाद अलग किया गया था और Kravtiz (Kravitz और पॉटर, 1965 Kravitz, 1962, Kravitz एट अल, 1963a, ख.) द्वारा की पुष्टि की लॉबस्टर सलामी बल्लेबाज की तैयारी के axons से. क्रेफ़िश मांसपेशियों को न केवल आसानी से सुलभ तैयारी की पेशकश की, लेकिन एक अध्ययन करने के लिए एकल कैसे एक शारीरिक और संरचनात्मक स्तर पर पहचाने जाने योग्य मोटर न्यूरॉन्स विभिन्न postsynaptic प्रतिक्रिया में परिणाम कर सकते हैं अनुमति देता है. विशेष रूप में सलामी बल्लेबाज की मांसपेशी एक एकल उत्तेजक मोटर न्यूरॉन द्वारा innervated है, लेकिन अलग – अलग स्थानों पर उत्तेजक postsynaptic क्षमता (EPSPs) पृष्ठीय सतही फाइबर में 50 गुना (Bittner, 1968a, ख) से अधिक भिन्न और उदर सतही में के रूप में ज्यादा के रूप में 8 गुना कर सकते हैं फाइबर (Iravani 1965). "> लाभदायक पता चलता है कि क्रेफ़िश में सलामी बल्लेबाज NMJ अल्पकालिक सरलीकरण अलावा लंबी अवधि (LTF) सरलीकरण (शर्मन और Atwood, 1971), प्रदर्शन, इन जरूरत को संबोधित करने की घटना के लिए यंत्रवत आधार एक पक्ष के रूप में. नोट, potentiation लंबी अवधि (LTP) हड्डीवाला मस्तिष्क में की खोज की थी दो साल बाद (परमानंद और एल मो, 1973) क्रेफ़िश NMJ पर घटना के मूल खोज करने के लिए प्रशस्ति पत्र के बिना पर इस अवधि से कई विशेषताओं पर ध्यान केंद्रित जांचकर्ताओं. एटवुड एट अल, 1994;. Zucker, 1973, 1974a, ख, Bittner और Sewell, 1976, एसटीएफ और LTF क्रेफ़िश के सलामी बल्लेबाज NMJ का उपयोग करने के लिए सेलुलर तंत्र (Atwood, 1973, 1976, 1982 अध्ययन के Parnas एट अल, 1982a, ख, ग, घ, Dudel एट अल, 1983;. Vyshedskiy और लिन, 1997a, ख, ग) इसके अलावा एक फोकस बिंदु को समझने के लिए कैसे एक एकल मोटर न्यूरॉन सलामी बल्लेबाज पेशी पर विभिन्न मांसपेशियों फाइबर innervating जन्म दे सकता है किया गया है जैसे विभिन्न synaptic प्रतिक्रियाओं (Linder, 1974; जी ¨ nzel एट अल, 1993, गोविंद एट अल, 1994; Iravani, 1965; Atwood, 1967, Bittner, 1968a, ख, शर्मन और Atwood, 1972; Zucker, 1974a; Parnas एट अल, 1982a; Zucker और Haydon, 1988; Dudel, 1989a, ख, ग, घ). अंतर synaptic प्रतिक्रिया के लिए खाते में Synaptic संरचना ultrastructural विश्लेषण (Jahromi और Atwood, 1974) के माध्यम से जांच की जा सकता है. ईओण गतिविधि के कारण मतभेद के उपाय करने के लिए सीए 2 + और ​​ना + के रूप में अच्छी तरह के रूप में संकेतक सीए 2 + बफ़र्स (. Mulkey और 1993 Zucker, लांस एट अल, 2002) के axonal इंजेक्शन के साथ जांच हो करने में सक्षम है, और इन अपशिष्टों टर्मिनल के भीतर मॉडलिंग हो सकते हैं (लांस एट अल, 1994; कूपर एट अल, 1996b). निर्भर गतिविधि (. एटवुड एट अल, 1991) रूपांतरों और neuromodulator रिसेप्टर उपप्रकारों (Dropic एट अल, 2005 के औषधीय पहचान; Ruffner एट अल, 1999, Sparks और कूपर, 2004; स्पार्क्स एट अल, 2004;. ताबोर और कूपर , 2002;) कि synaptic पुटिका पूल और कैनेटीक्स (Logsdon एट अल, 2005 को प्रभावित; Southard एट अल, 2000;. स्पार्क्स एट अल, 2003) भी जांच किया गया है जो नए प्रश्नों के रास्ते को संबोधित किया जाना प्रमुख है . एसटीएफ बनाम झिल्ली विध्रुवण में सलामी बल्लेबाज NMJ पर synaptic प्रसारण के दौरान कैल्शियम की भूमिका की अवधारणाओं राय (; Hochner एट अल, 1989 Mulkey और Zucker, 1991) में कुछ मतभेद के लिए सीसा . अपेक्षाकृत हाल ही में synaptic शक्ति और एक मोटर न्यूरॉन से सुविधा में क्षेत्रीय भेदभाव, को संबोधित किया गया है और संरचना में synaptic स्थानीय presynaptic परिवर्तन और शरीर विज्ञान (Atwood एट अल, 1994 से मतभेद के कारण प्रतीत होता है, एटवुड और कूपर, 1995, 1996a , ख, कूपर एट अल, 1995b, 1996a, ख). इलेक्ट्रॉन micrographic अध्ययनों से Ultrastructural विश्लेषण से पता चला है कि varicosities synaptic संपर्क (फ्लोरे और काहिल, 1982; कूपर एट अल, 1995b) के बहुमत के होते हैं . एक टर्मिनल है जो synaptic संरचना (; गोविंद एट अल, 1994 कूपर एट अल, 1996a) की जटिलता के कारण प्रतीत होता है की लंबाई के साथ synaptic प्रसारण की ताकत घट जाती है. सीए 2 में मतभेद + बाढ़ विभिन्न आवृत्तियों (कूपर एट अल, 1995b, 1996b) में उत्तेजना के दौरान समझाने भाग में synaptic संरचना में मतभेद हो सकता है. के बाद से वहाँ पेशी phenotype और जैव रसायन में सलामी बल्लेबाज की मांसपेशी फाइबर के बीच क्षेत्रीय मतभेद हैं (जी ¨ nzel, एट अल, 1993; Mykles एट अल, 2002), जो क्षेत्रों में विभाजित कर रहे हैं एक developmentally विनियमित मांसपेशियों phenotype समझा सकता है कि प्रभावित करती है और मोटर न्यूरॉन (Mykles एट अल., 2002) के क्षेत्रीय मतभेद रखता है. प्रतिगामी प्रभावों का विचार मेंढक कंकाल की मांसपेशी (Nudell और Grinnell, 1983) में जांच की गई है, झींगा (Katz एट अल, 1993) में, और क्रेफ़िश (Lnenicka और मेलॉन, 1983) में उचित ठोस सबूत के साथ. अन्य टर्मिनलों को प्रभावित किए बिना एक न्यूरॉन में टर्मिनलों के स्थानीय विनियमन spatially crustacean मोटर न्यूरॉन्स में बहुत संभव है क्योंकि टर्मिनल की दूरी में एक दूसरे से 1cm से 10cm करने के लिए उपाय कर सकते हैं. रीढ़ के विपरीत, एक मोटर इकाई शामिल हो सकते हैं और अधिक है कि अकशेरूकीय में एक पेशी (Atwood, 1973 द्वारा समीक्षा देखें). excitor मोटर न्यूरॉन है कि पूरे सलामी बल्लेबाज मांसपेशी innervates भी अधिक समीपस्थ पैर खंड में स्ट्रेचर मांसपेशियों innervates है. सलामी बल्लेबाज मांसपेशी की मांसपेशी फाइबर के बीच सुविधा माप से पता चला है कि वहाँ मतभेद जो सीए 2 में आराम स्तर से संबंधित हो सकता है + (कूपर एट अल., 2005b) आयनों और / या संभवतः रिलीज के cooperatively (Parnas एट अल, 1982a , ख) acti की भर्ती करने के लिए सम्मान के साथ सलामी बल्लेबाज पेशी पर टर्मिनलों के साथ उच्च और कम उत्पादन के synapses के बीच संरचनात्मक जटिलता में मतभेद quantal हस्ताक्षर के लिए जांच की गईएसटीएफ के दौरान synapses के बीच क्षेत्रों ve लेकिन यह करने के लिए मुश्किल हो सकता है सिद्ध किया गया है का पता लगाने (Lancaster एट अल, 2007; Viele एट अल, 2003, 2006). विभिन्न कैनेटीक्स में विनियमित किया जा के रूप में जाना जाता है उच्च और कम उत्पादन synapses के बीच संभावित vesicles के पूल साबित neromodulators अंतर प्रभाव कम और उच्च उत्पादन टर्मिनल (Logsdon एट अल, 2005 पर है, Sparks और कूपर , 2004; कूपर एट अल, 2003). क्रेफ़िश में सलामी बल्लेबाज मांसपेशी की तैयारी के भविष्य के उपयोग के रूप में समृद्ध है के रूप में यह 50 या 100 साल पहले किया गया है. तैयारी अभी भी कई अन्य synaptic तैयारी की तुलना में बहुत साहसी है. Quantal प्रतिक्रियाओं किया जा सकता है electrophysiological synaptic संपर्कों को सीधे दर्ज के रूप में अच्छी तरह के रूप में अच्छी तरह से परिभाषित टर्मिनल के विभिन्न प्रकार में पुटिका गतिशीलता के लिए imaged. तैयारी उत्तेजक और निरोधात्मक आदानों के लिए एक से पहचाने जाने योग्य न्यूरॉन्स होने में अपने आकर्षण नहीं खोया है. आनुवंशिक हेरफेर के लिए क्रेफ़िश नहीं किया जा रहा है व्यावहारिक के बावजूद, अध्ययन संभव हो रहे हैं ड्रोसोफिला के लिए के रूप में synaptic प्रोटीन की भूमिका का पता. ड्रोसोफिला NMJs (एटवुड और कूपर, 1995, 1996a, ख) synaptic समारोह में कई समानताएं है कि प्रोटीन इंजेक्शन अध्ययन के द्वारा जांच की जा सकती है (वह एट अल, 1999) हैं. मोटर तंत्रिका टर्मिनल के भीतर synaptic पुटिका पूल के नियमन भी भविष्य के रूप में के रूप में अच्छी तरह से जांच यंत्रवत अध्ययनों के लिए एक समृद्ध क्षेत्र है कैल्शियम के दौरान विनियमन एसटीएफ (देसाई शाह एट अल, 2008; देसाई शाह और कूपर, 2009) को समझने के लिए कई समझाने synaptic प्रसारण की बुनियादी बातों में शेष रहस्यों में से एक. तरीके विच्छेदन क्रेफ़िश, Procambarus clarkii, शरीर की लंबाई में 6-10 सेमी को मापने (Atchafalaya जैव आपूर्ति कं, Raceland, ला) जबरदस्ती ischiopodite खंड में pinching द्वारा पहले या दूसरे पैर चलने automize के लिए प्रेरित कर रहे हैं. पैर जब तक एक यकीन है कि (पार्श्व की ओर) बाहर विच्छेदन प्लेट पर का सामना करना पड़ रहा है हो सकता है चारों ओर मुड़ें. यह आमतौर पर धनुषाकार पक्ष है. टिशू पेपर के एक टुकड़े पर पैर रखकर इतना तैयारी आसानी से दिया जा सकता है है जबकि इन कटौती करने में मदद करता है. एक स्केलपेल ब्लेड ब्रेकर और धारक के साथ एक तेज धार तक खोदना छल्ली meropodite खंड के लिए इस आंकड़े में दिखाया पैटर्न में बस के माध्यम से काटने के लिए प्रयोग किया जाता है. Carpopodite संयुक्त – केयर दूर पृष्ठीय पर बाहर का नहीं meropodite द्वारा उदर में कटौती करने के लिए काट करने के लिए इस्तेमाल किया जा जरूरत है. छल्ली में अब के लिए जगह छोड़ दें. Propodite पर उस्तरा स्केलपेल छल्ली खोदना ब्लेड के साथ सिर्फ एक तरफ propodite खंड के लिए ऊपर आंकड़ा में दिखाया पैटर्न में के माध्यम से काटने और फिर दूसरी तरफ दोहराना प्रॉक्सिमल कटौती में शामिल होने तक. देखभाल करने के लिए सलामी बल्लेबाज की मांसपेशी में कटौती नहीं करने के लिए इस्तेमाल किया जा जरूरत है. यह करीब मांसपेशियों को जब छल्ली के माध्यम से काटने ब्लेड झुकाव रखने के द्वारा किया जा सकता है. उदर में कटौती करने के लिए पृष्ठीय के लिए इसके अलावा, उदर ओर जोड़ने में कटौती नहीं भी प्रॉक्सिमल संयुक्त कनेक्शन के रूप में संकीर्ण है और आसानी से टूट गया है सावधान रहना. छल्ली में अब के लिए जगह छोड़ दें. तैयारी खारा में रखा जाना चाहिए. यह विच्छेदन पकवान तल पर एक Sylgard (डॉव Corning) कोटिंग (1cm मोटी) Sylgard इतना प्रयोग किया जाता है कि कीट पिन तैयारी अभी भी आयोजित करने के लिए इसे में अटक जा सकता है. चाहिए. पृष्ठीय दुम कोने में इस बिंदु पर एक पिन छड़ी, कट meropodite में बनाया विंडो के भीतर. (# 5) ठीक चिमटी के साथ थोड़ा बाहर का अंत से छल्ली उठा और रेजर के साथ, flexor मांसपेशी फाइबर छल्ली से दूर कटौती, एक बाहर का में प्रॉक्सिमल तरीके को काटने के. छल्ली बंद की खिड़की लिफ्ट. Carpopodite संयुक्त (नीचे दिखाया गया है) – अब meropodite (कण्डरा) apodeme में कटौती. बहुत कण्डरा दूर कटौती करने से पहले पैर गुहा से खींचने के लिए और केवल कण्डरा और मुख्य पैर नहीं तंत्रिका कि कण्डरा के भीतर की ओर है में कटौती के लिए सावधान रहें. कण्डरा जहां यह चिमटी के साथ काट दिया गया पिंच और flexor मांसपेशियों यह एक दुम दिशा में उठाने से खींच. अब मुख्य पैर तंत्रिका और extensor मांसपेशियों उजागर कर रहे हैं. Propodite खंड के लिए आगे बढ़ें और अब propodite dactylop में कटौतीसंयुक्त odite. यहाँ करीब कण्डरा शायद छल्ली लगाव से कटौती. नीचे और वापस caudally propodite के उदर खंड (करीब मांसपेशियों की ओर) खींचो, ताकि मांसपेशियों दुम क्षेत्र में संलग्न देखा जा सकता है. रेजर के साथ इन मांसपेशियों कट. सावधान रहो, नहीं मांसपेशी भी कटौती के संयुक्त जोखिम और सलामी बल्लेबाज मांसपेशी मोटर तंत्रिका शाखा काटने के करीब है. सलामी बल्लेबाज मांसपेशी अब खारा से अवगत कराया है. तंत्रिका बंडलों के सलामी बल्लेबाज की मांसपेशियों को उत्तेजक और निरोधात्मक मोटर न्यूरॉन्स युक्त अलग meropodite क्षेत्र के लिए लौटें. Meropodite खंड के सबसे दुम क्षेत्र में पैर तंत्रिका बंडल आम तौर पर एक अलग तंत्रिका बंडल शामिल हैं. इस छोटे से क्षेत्र है जहां दो बंडलों को देखा जा सकता है जहां पृष्ठीय बंडल ठीक कैंची से transected किया जा सकता है. कटौती अंत तो # चिमटी 5 के साथ कर सकते हैं उठाया जा और धीरे से खींच distally जब तक के बारे में आधा meropodite खंड की लंबाई तक पहुँच जाता है. यह लंबे समय तंत्रिका शाखा उत्तेजक सलामी बल्लेबाज तंत्रिका होता है और नसों का बड़ा बंडल सलामी बल्लेबाज मांसपेशी की निरोधात्मक मोटर न्यूरॉन है. meropodite खंड में तैयारी अब एक विकर्ण ऐसी है कि एक कीट पिन meropodite के पृष्ठीय पहलू के माध्यम से रखा जा सकता है है तरीके से कट जाता है. इस सलामी बल्लेबाज की मांसपेशी के उदर पहलू इतनी है कि यह पर्यवेक्षक चेहरे (के रूप में नीचे दिखाया गया है) पदों. करीब मांसपेशियों की अवशिष्ट फाइबर है कि सलामी बल्लेबाज की मांसपेशी के दृश्य ब्लॉकों अब छल्ली और propodite गुहा के बाहर के खिलाफ धक्का फाइबर द्वारा हटाया जा सकता है है. कभी कभी एक संयोजी ऊतक सलामी बल्लेबाज है जो ध्यान से # 5 चिमटी का उपयोग करके हटाया जा सकता है है शामिल हैं. मुख्य पैर तंत्रिका है कि सलामी बल्लेबाज मांसपेशी के साथ चलाता है और dactylopodite में चला जाता है है या तो कटौती dactylopodite संयुक्त या बस ठीक चिमटी के साथ खिंचाई की शुरुआत में किया जा सकता है. यह मुख्य पैर तंत्रिका और कभी कभी स्पष्ट जुड़े रक्त वाहिका अब एक प्रॉक्सिमल दिशा में धीरे से कर सकते हैं सलामी बल्लेबाज मांसपेशियों की लंबाई के लिए खींच लिया और फिर दूर कटौती. अब सलामी बल्लेबाज मांसपेशी किसी भी ऊतक के एक intracellular इलेक्ट्रोड या एक फोकल macropatch इलेक्ट्रोड के रास्ते में मिल के बिना संपर्क में है. आदेश में सलामी बल्लेबाज मांसपेशी उत्तेजक तंत्रिका को प्रोत्साहित करने के लिए की तैयारी अब एक प्लास्टिक चूषण इलेक्ट्रोड के साथ बनाया गया एक रिकॉर्डिंग कक्ष में ले जाया जाता है. उत्तेजक चेंबर में बनाया इलेक्ट्रोड होने के लिए एक micromanipulator का उपयोग करने के लिए एक उत्तेजक इलेक्ट्रोड जगह होने से बचा जाता है. रिकॉर्डिंग पकवान में तैयारी नीचे पिन और तंत्रिका कि चूषण इलेक्ट्रोड में उत्तेजक तंत्रिका शामिल की शाखा जगह. (से ली गई है: Mykles, डीएल, Medler, एसए, Koenders, ए, और कूपर, आरएल (2002) Myofibrillar प्रोटीन isoform, अभिव्यक्ति और क्रेफ़िश और समुद्री झींगा पंजा पैर के सलामी बल्लेबाज मांसपेशियों की धीमी गति से फाइबर में synaptic प्रभावकारिता के साथ सहसंबद्ध है जर्नल के. प्रायोगिक जीवविज्ञान (4) 205: 513-522). खारा (KCl 5.3, CaCl2.2H2O 13.5, MgCl2.6H2O 2.45, 5 HEPES 7.4 पीएच को समायोजित मिमी में 205 NaCl) dissected तैयारी क्रेफ़िश खारा, एक संशोधित वान Harreveld समाधान में रखा जाता है. Intracellular EPSPs रिकॉर्डिंग एक पैदा प्रतिक्रिया प्रकाश में लाना करने के लिए, उत्तेजक अक्षतंतु चुनिंदा घास उत्तेजक द्वारा प्रेरित है. सलामी बल्लेबाज की मांसपेशी के एक क्षेत्र में तेज intracellular (20 से 30 mOhm प्रतिरोध) इलेक्ट्रोड एम 3 KCl के साथ भर के साथ impaled है. Intracellular रिकॉर्डिंग के लिए एक मानक सिर मंच और प्रवर्धक इस्तेमाल किया जा सकता है, लेकिन हम एक मॉडल का इस्तेमाल किया 2B Axonclamp (आण्विक डिवाइसेज, Sunnyvale, CA, संयुक्त राज्य अमरीका) एम्पलीफायर और 1 एक्स लू सिर मंच. लघु अवधि (एसटीएफ) के सरलीकरण या वांछित प्रतिक्रियाओं के विभिन्न अन्य प्रकार प्रोत्साहन शर्तों के अलग द्वारा प्राप्त किया जा सकता है. एसटीएफ 10 या 20 सेकंड अंतराल, क्रमशः पर 10 या 20 दालों की एक ट्रेन देने, उत्तेजक तंत्रिका द्वारा प्राप्त है. ट्रेन के भीतर उत्तेजना की आवृत्ति (40, 60 और 80 हर्ट्ज) अलग किया जा सकता है. Intrअकोशिकीय EPSP रिकॉर्डिंग नियमित रूप से इन मानक प्रक्रियाओं द्वारा प्रदर्शन कर रहे हैं (Crider और कूपर, 1999, 2000,. कूपर एट अल 1995b, Dudel, 1983, Sparks और कूपर, 2004; देसाई शाह और कूपर, 2009 ). बाहर का, केंद्रीय और प्रॉक्सिमल: सलामी बल्लेबाज मांसपेशी तीन सामान्य क्षेत्रों में बांटा गया है. हालांकि पूरे खुले मांसपेशी एक एकल मोटर न्यूरॉन द्वारा innervated है, NMJs structurally अलग हैं और इन तीन सामान्य क्षेत्रों (कूपर एट अल 1995a, ख) में क्षेत्रीय विशिष्ट synaptic प्रभावकारिता में मतभेद है. मांसपेशी फाइबर phenotype के प्रकार भी इन क्षेत्रों में अलग अलग हो (2002 Mykles एट अल.) दिखाया गया है . इन कारणों के लिए, सबसे बाहर का फाइबर का इस्तेमाल कर रहे हैं, क्योंकि वे आसानी से तैयारी के बीच निरंतरता के लिए सीमांकन कर रहे हैं. तंत्रिका टर्मिनल के पहचान क्षेत्रों पर सीधे केन्द्र quantal EPSPs रिकॉर्डिंग synaptic varicosities महत्वपूर्ण डाई 4-डि – 2 – Asp (Magrassi एट अल., 1987), जो synaptic प्रसारण को प्रभावित नहीं करता कार्यरत सांद्रता और बार में (5 सुक्ष्ममापी, 5 मिनट उपचार, कूपर एट अल के साथ कल्पना कर रहे हैं 1995b). प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी के साथ, एक रिकॉर्डिंग मैक्रो – पैच इलेक्ट्रोड (कूपर एट अल, 1995c.; सेंट ¨ hmer एट अल, 1983) के लुमेन एक एकल पृथक varicosity पर सीधे रखा सकता है . तंत्रिका टर्मिनल आह्वान, उत्तेजक मोटर तंत्रिका उत्तेजित है, जैसा कि ऊपर उल्लेख किया. के रूप में के रूप में अच्छी तरह से पैदा की स्वतःस्फूर्त quantal प्रतिक्रियाएं कल्पना varicosities के स्ट्रिंग के साथ दर्ज किया जा सकता है, धीरे कम लुमेन और प्रत्येक varicosity पर जुटाने. Wojtowicz एट अल, synaptic क्षमता एक मैक्रो – पैच के रूप में अनिवार्य रूप से Dudel, 1981 द्वारा वर्णित इलेक्ट्रोड के माध्यम से दर्ज कर रहे हैं. (1991) और (1993) Mallart. Kimax ग्लास (बाहरी व्यास: 1.5 मिमी) खींच लिया और अंदर 10 से 20 सुक्ष्ममापी को लेकर diameters के साथ पैच सुझावों का उत्पादन आग पॉलिश. इलेक्ट्रोड के लुमेन स्नान मध्यम से भरा है. प्रवर्धक intracellular उपर्युक्त रिकॉर्डिंग के लिए इस्तेमाल किया है कि के रूप में ही है. इलेक्ट्रोड और सील प्रतिरोध इलेक्ट्रोड के माध्यम से गुजर परीक्षण वर्तमान दालों के द्वारा निर्धारित किया जा सकता है है. सील resistances 0.3 से 1.0 M0hm लेकर और इलेक्ट्रोड प्रतिरोध 0.5 से M.0 1.0 करने के लिए लेकर. सील प्रतिरोध रिकॉर्डिंग के दौरान निगरानी किया जा सकता है. Quantal घटनाओं की प्रत्यक्ष गिनती कम उत्तेजना आवृत्तियों के साथ संभव है. प्रत्येक पैदा प्रतिक्रिया के लिए, quantal घटनाओं की संख्या निर्धारित किया जा सकता है. प्रतिक्रियाओं की एक श्रृंखला के लिए, quantal घटनाओं की कुल संख्या तो मतलब quantal इन प्रत्यक्ष मायने रखता है पर आधारित सामग्री का अनुमान गिने जाते हैं. एक quantal सामग्री मतलब गणना दृष्टिकोण प्रतिक्रियाओं की कुल संख्या (डेल Castillo और Katz, 1954) द्वारा क्वांटा और विभाजन की कुल संख्या ले जा रहा है. वहाँ अन्य तरीकों से एक का उपयोग कर सकते हैं के रूप में अच्छी तरह से चोटी आयाम या EPSPs के क्षेत्र (कूपर एट अल., 1995b) पर आधारित हैं .